三氧化二砷对LA-N-5细胞MYCNmRNA表达及细胞侵袭性的影响

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:seedvs18606
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背景:神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)是儿童时期最常见的颅脑外实体肿瘤,其进展速度、耐药性及预后等特点与MYCN基因mRNA的超量表达密切相关。由于其转移早,恶性程度高,尽管采取积极的治疗,目前5年生存率仍然极低,因此迫切需要寻找新的治疗方法以改善NB的预后。三氧化二砷(As2O3)由我国学者首先用于急性早幼粒细胞性白血病(APL)的治疗并取得了较好疗效,但其作用机制不清,可能与促进肿瘤细胞凋亡、抑制瘤细胞生长等有关。As2O3分子作用机制及对NB细胞侵袭性的影响尚缺乏研究。目的:研究As2O3对LA-N-5细胞MYCN mRNA表达及其细胞侵袭力的变化,以探讨As2O3对NB的作用机制。方法:实验分两部分,一、采用RT-PCR检测As2O3作用前后LA-N-5细胞MYCN mRNA的变化;二、用Transwell小室检测As2O3作用后LA-N-5细胞侵袭能力的变化。将LA-N-5细胞与不同浓度的As2O3共同培养24h、48h和72h,提取RNA,反转录后行PCR,产物用琼脂糖电泳,紫外凝胶扫描仪观察电泳结果,并用凝胶成像仪附带的图像分析软件,测定电泳条带的光密度值,求出各浓度及时间点的平均值,以MYCN/GAPDH光密度比值表示单细胞MYCN mRNA表达水平相对值并做量化统计分析;用铺有Matrigel的Transwell小室模拟哺乳动物的基底膜,光学显微镜观察LA-N-5在As2O3作用后穿过膜的细胞数量,了解细胞侵袭能力改变。结果:1.0.75μmol/L、1.5μmol/L、3.0μmol/L的As2O3作用48小时均可使LA-N-5细胞MYCN mRNA的表达减少,以3.0μmol/L组最明显,MYCN/GAPDH光密度比值分别为0.89±0.03,0.98±0.05,0.52±O.03,对照组为1.21±0.02,与对照组相比,P均<0.01;2.相同浓度下(3.0μmol/L),As2O3作用48h后MYCN mRNA的表达明显降低,延长时间后抑制作用仍能保持,24h、48h、72h MYCN/GAPDH光密度比值分别为1.18±0.04、0.64±0.03、0.86±0.01,对照组为1.15±0.02,与对照组相比,P值分别为0.081、0.000、0.000;3.以上述三个浓度的As2O3作用24h后,LA-N-5细胞穿过matrigel侵袭膜的细胞数均较对照组减少,分别为28.00±4.00、19.33±4.16、6.33±1.53,对照组为46.33±6.11,以3.0μmol/L组减少最明显,实验组与对照组比,P值分别为0.013、0.003、0.000。结论:As2O3可以抑制LA-N-5细胞MYCN mRNA的表达及NB细胞的侵袭能力,且随着浓度增加抑制作用增加。
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