镰形扇头蜱卵巢Serpin分子影响蜱吸血和产卵作用研究

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蜱是一种常见的吸血性节肢动物,也是一种重要的疾病传播媒介,其传播疫病种类繁多,可以传播寄生虫病、病毒病、细菌病、螺旋体病等,蜱及其蜱传染病一直是困扰世界上众多国家和我国畜牧业的重大问题之一。丝氨酸蛋白酶抑制分子(Serine Protease Inhibitor,Serpin)在生物体内分布广泛,参与多种机体生物学功能。Serpin发生构像改变,并与相对应靶蛋白酶相结合紧密复合物,导致两者发生失活,这种反应不可逆,因此它被称为“自杀性”抑制剂。前期对来自蜱卵巢的多个Serpin分子进行了克隆,但对其生物学功能研究涉足较小。因此,了解这些蜱Serpin分子的生物学功能,为发现防治蜱研发新药物提供基本理论,其具有十分重要价值。本研究以镰形扇头蜱(R.haemaphysaloides)卵巢的多个Serpin分子为对象开展研究。首先,将对RHS3~RHS11等9个蜱卵巢来源的Serpin基因构建好的表达载体进行纯化,然后采用Western blot方法分析这些分子在蜱不同发育阶段和不同组织器官的表达特征。结果显示:Serpin分子会在幼蜱、若蜱和成蜱吸血过程中通过唾液分泌到宿主体内。不同组织器官中Serpin表达情况来看,RHS3、RHS9和RHS10均在卵巢中呈特异性表达,RHS6与RHS7在唾液腺中特异性表达,而RHS4多在脂肪体中特异表达,RHS5和RHS8蛋白在卵巢、唾液腺和脂肪体等多器官表达,而未发现RHS11在各器官中表达。其次,通过RNA干扰实验,观察RHS3~RHS11等9个蜱卵巢来源的Serpin基因敲低后,蜱的吸血时间、饱血体重和产卵情况,以探讨其在吸血和产卵上的作用。通过收集吸血第5d的雌蜱,解剖后收集卵巢、中肠、唾液腺和脂肪体,采用荧光定量PCR方法检测基因的表达水平变化情况。结果表明,RNA干扰均有效地降低Serpin基因表达。基因干扰后,RHS3与RHS7下调后,其明显地降低镰形扇头蜱雌蜱的吸血能力,RHS8显著地降低雌蜱的卵巢孵化率,而其他Serpin则无明显地影响蜱吸血和产卵作用。本论文初步阐明了卵巢来源的Serpin分子在吸血和产卵等生物学功能上发挥的作用是不同的,且确定了部分Serpin分子的具有潜在的应用价值,这为蜱及蜱传病防治提供数据基础。
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