大花剪秋萝组织培养技术研究

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本试验以大花剪秋萝(Lychnis fuLgens Fisch.)的种子、茎尖、地下越冬芽、茎节、花苞为材料。探索大花剪秋萝最佳的启动培养基、增殖培养基、生根培养基、炼苗基质、离体保护培养基。本试验采用spss17.0软件进行分析。研究结果:1.大花剪秋萝组织培养的基本环境:温度23±2℃,光照强度2000-3000Lx,pH5.80,组织培养试管苗生长最快,既高大又健壮,有利于培育幼苗。2.大花剪秋萝外植体的采集时间及无菌苗的获得:以当年7月末八月初,选取的成熟度为80-90%大花剪秋萝种子、4-5月的地下越冬芽及茎节以及6-7月花苞进行试验。用0.1%升汞和吐温80对种子灭菌4min、地下越冬芽灭菌13min、茎尖灭菌10min、茎节灭菌12min、花苞灭菌5min;无菌水冲洗6次以上。种子萌发最适培养基为MS+1.0mg/L6-BA+30g/L蔗糖+10g/L琼脂,污染率为23.33%,死亡率为25.41%,平均诱导率为53.1%。茎尖、茎节、地下越冬芽、花苞的最佳诱导培养基为MS+0.8mg/L6-BA+0.08mg/L NAA+30g/L蔗糖+10g/L琼脂,其中茎节诱导效果最佳,诱导率高达90%,污染率为18.67%,死亡率为25.12%。3.最佳继代增殖培养基:MS为最佳继代增殖培养基。NAA为最佳生长激素,6-BA为最佳植物细胞分裂素,最适浓度配比为NAA0.03mg/L和6-BA3.0mg/L,最高增殖系数5.5,生长健壮,无突变。4.为保证组培苗的质量,在继代增殖培养过程中,最佳继代周期为30d,增殖系数高达5.5,丛生芽分化快速且繁多;叶色均匀,叶片圆润;继代6次为最佳时间,平均增殖系数为5.5,无菌苗生长健壮;3-4个芽为一丛,接入培养基平均增殖系数为5.6,无菌苗生长健壮。5.试管苗的壮苗培养:以MS为基本培养基,加入植物细胞分裂素6-BA3.0mg/L,生长激素NAA0.03mg/L,蔗糖35mg/L为最佳壮苗培养基,叶片平展圆润,且浓绿长势健壮。利于大花剪秋萝组织培养的生根培养试验。6.生根培养中最佳培养基配方:1/2MS+1.0mg/L NAA,为最佳生根培养基,平均生根率为88.13%,不加入活性炭,定值株数为3-4株,平均生根率89.13%,组培苗生长良好,根系发达,苗高长势一致,叶片色泽大小均匀,炼苗成活率高。活性炭对其影响极其微小,故在组织培养过程中无需增加活性炭。7.移栽驯化:最适合大花剪秋萝无菌苗移栽的基质配比为园土:草炭:河沙(V:V:V)=1:1:1混合基质,浓度为0.1%多菌灵进行消毒,占根的高猛酸钾浓度为0.05%;用透明朔料杯覆盖在无菌苗上,以起到保湿作用,把其放在22℃的环境中进行培养试验;每天13点通风30min;移栽初期覆以70%遮阴网,后期逐渐移去遮阴网。移栽成活率可达93.52%小苗长势较好,生长健壮,叶片圆润平展,色泽浓绿。8.离体保护:采用营养饥饿的方法对长白山直立矮化型大花剪秋萝进行离体保护,1/10MS(大量元素)+1/3MS(微量元素)+1/2MS(Fe盐)+1/4MS(有机物质)是最适合保存的培养基,最适合保存条件为19-21℃,12h光照,恢复率高达86.97%,无变异情况,且组培苗生长良好,叶片浓绿、平展圆润。
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