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乳腺炎是奶牛最常见的疾病之一,目前仍然没有被攻克,临床型乳腺炎是奶牛养殖户面临的严重问题,造成巨大的经济损失。革兰氏阴性菌是引起奶牛临床型乳腺炎的重要原因,而且患临床型乳腺炎的奶牛往往有明显的临床症状,甚至会引起个体的死亡。Toll样受体( Tol-l like receptors,TLRs)家族是一组具有重要功能的,且介导天然免疫的模式识别受体。虽然不同的TLR所识别的病原相关分子(PAMPs)有所侧重,髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88),依旧是此类受体信号转导通路中关键的连接蛋白,也是信号向下游转导的关键靶分子。在奶牛临床型乳腺炎中主要作用是介导促炎症反应和免疫抑制信号传递。然而,MyD88基因突变及其对奶牛临床乳腺炎的易感性鲜为人知的。 本文应用单链构象多态方法(single-strand conformation polymorphism, PCR-SSCP)分析中国荷斯坦奶牛MyD88基因的多态。5个与乳腺炎相关的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)被发现,分别在外显子1、内含子2、外显子3和内含子4。第一外显子信号肽部位的1个SNP位点g.9 A→C(3Glu→Asp)位于等位基因B,导致蛋白质二级结构的改变;在成熟的MyD88蛋白中,两个关键的SNPs导致氨基酸的改变:g.1755 G→A(180Arg→Gln)位于等位基因F, g.1858 G→T(214 Lys→Asn)位于等位基因G。它们都影响蛋白质的二级结构,但对六种预测蛋白进行三级结构预测分析发现它们完全一致。有趣的是, BB(突变型g.9 A/C),CD(杂合型g.1516 C/G), FF(突变型g.1755 G/A),GG(突变型g.1858 G/T)以及II(突变型g.2270 A/G)这些基因型的奶牛发病率明显高于本研究中的其他基因型(p<0.01)。研究结果表明,这些SNPs可能影响了MyD88蛋白的分泌和MyD88蛋白对TLR的结合能力,可以用作标记培育耐乳腺炎奶牛。