结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,是危害人类健康的主要问题,也是世界上由癌症导致死亡的第三大主要原因。尤其在中国,随着经济的发展和现代生活方式的改变,以及饮食结构的改变和日益严重的社会老龄化,结直肠癌的发病率不断升高并有向更低年龄段发展的趋势。与此同时,结直肠癌的发病机制复杂,目前治疗方式以化疗为主,且治疗药物如5-氟尿嘧啶和顺铂存在副作用大、耐药性强等问题,导致治疗效果不佳。在此情况下,亟待研发高效、低毒性的结直肠癌治疗药物。目前,在药物研发方面,真菌类多糖在多项研究中展示出有效防癌作用,且毒副作用低,因此极具研究价值。其中,榆耳,一种药食兼用的真菌,历来被用来治疗腹泻、溃疡性肠炎等肠道疾病,且近年来的研究发现,其子实体和发酵液具有抗菌消炎、增强免疫等活性,但其主要成分榆耳多糖(Gloeostereum incarnatum polysaccharides,GIPS)在辅助治疗结直肠癌方面的影响尚未得到系统报道。为此,本文旨在研究榆耳多糖对结直肠癌的治疗效果及其潜在的作用机制。具体研究内容及结果如下:1.榆耳多糖提取工艺的优化。本文采用热水浸提法配合三氯乙酸除蛋白、醇沉、透析及DEAE-52离子交换层析法等步骤得到活性榆耳多糖,并采用单因素试验,得到最佳的榆耳多糖提取条件。使用本文的提取工艺,最终榆耳多糖提取得率为12.36%,纯度为86.41%,为榆耳多糖的活性研究奠定基础。2.榆耳多糖对结肠癌小鼠的治疗作用及其机制研究。本文在APC基因缺失的结肠癌小鼠模型中,经过8周给予GIPS治疗,进行生理生化指标测定,并采用抗体芯片、酶联免疫吸附测定和蛋白质免疫印迹实验测定相关细胞因子的表达水平。实验结果表明,GIPS给药能够有效逆转结肠癌小鼠体重的下降及肝脏的损伤,结肠组织肿瘤数目显著减少、肿瘤体积有所减小。抗体芯片测定GIPS对308种细胞因子表达水平的影响,发现其中89种出现显著变化,并可能通过炎症相关通路、白介素信号通路、Wnt信号通路、细胞凋亡及血管生成等相关通路发挥作用。酶联免疫吸附测定和蛋白质免疫印迹实验进一步测定多种标志性细胞因子,证明GIPS在结肠癌小鼠中对IL-1β、IL-4、IL-6、IL-17、IL-22、TNF-α、MMP-2、MMP-9、Wnt1、β-catenin、Frizzled-7、LRP5/6、GSK-3β存在抑制作用,而对IL-15、IL-18、DKK1、Kremen-2存在促进作用,有效抑制了肿瘤细胞的增殖、肿瘤内微血管的生成、肿瘤的侵袭和转移,尤其在Wnt/β-catenin通路上,GIPS可在细胞膜水平上抑制Wnt信号及相关受体的表达,在细胞质内促进β-catenin的降解,从多方面抑制了该通路,进而达到治疗作用。综上所述,结肠癌小鼠模型试验验证了GIPS对结肠癌的治疗作用,并初步确定了其作用机制,为GIPS作为预防或治疗结直肠癌的候选药物提供了药效学依据。