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灵芝作为一种药用真菌,在我国已经有了很多年的使用历史。随着科研人员对灵芝的研究不断深入,灵芝的营养价值和药理作用也逐渐被开发利用。而灵芝的抗肿瘤、抗HIV、保肝和降血压等药理作用大部分是与灵芝多糖和三萜等活性成分有关。目前生产上获得灵芝多糖和三萜类化合物的来源主要是成熟子实体和液体发酵的菌丝。通过液体发酵技术来提取灵芝的多糖和三萜的周期较短,且操作简单。但如何提高液体发酵条件下灵芝多糖和三萜的含量成为了重要的研究方向。本文就以下几个方面进行了研究。1.比较了灵芝单双核菌株生长速度的差异,结果显示灵芝双核菌株的生长速度要显著高于单核菌株。同时比较了单双核菌株在静置培养和振荡培养下的生物量的差异。结果显示在静置培养下,双核菌株的生物量要显著高于单核菌株。而振荡培养时,单核菌株J-7与双核菌株的生物量相当。2.比较了在静置培养和振荡培养两种方式下下灵芝单双核菌株胞内多糖和胞外多糖的差异。在静置培养下,单核菌株J-7胞内多糖的含量最高,并且产胞外多糖也是最高的。而在振荡培养时,双核菌株J-7/AL-2与单核菌株J-7的胞内外多糖均无显著差异,但都比单核菌株AL-2高。3.比较了灵芝单双核菌株三萜含量的差异,并通过高效液相法对比了灵芝三萜的指纹图谱。发现无论是静置培养还是振荡培养,双核菌株J-7/AL-2菌丝三萜的含量都要显著高于两株单核菌株,而且它们的三萜指纹图谱也存在一定的差异。但比较了静置培养方式下灵芝酸E和F的差异,却发现都是单核菌株AL-2的灵芝酸E和F的含量会更高。同时比较了静置培养与振荡培养两种方式下灵芝产三萜能力的差异,发现静置培养的方式更有利于三萜的积累。4.通过荧光定量PCR 比较灵芝三萜关键酶基因表达量的差异。结果显示双核菌株的6个三萜关键酶基因表达量(HMGS、HMGR、MVD、FPS、SQS和LS)都要显著高于其他两株单核菌株。5.用钙离子和水杨酸对灵芝的多糖和三萜进行了诱导,比较了不同浓度和不同诱导时间下钙离子和水杨酸对灵芝多糖和三萜的影响,结果显示合适浓度的钙离子和水杨酸均能提高灵芝多糖和三萜的含量。10mM浓度的钙离子比较适合灵芝多糖和三萜的积累,而添加时间对灵芝三萜的影响不大。150uM浓度的水杨酸比较适合灵芝多糖和三萜的积累,而在水杨酸的最佳诱导时间是前两天,诱导时间太长甚至会抑制多糖和三萜的合成。6.比较了最适诱导条件下钙离子和水杨酸对灵芝单双核菌株的影响。结果显示,钙离子和水杨酸均能提高灵芝单双核菌株的多糖和三萜的含量,只是对不同菌株的诱导能力有所差异。7.对比了钙离子、水杨酸和钙离子与水杨酸组合三种不同诱导物对灵芝三萜合成的影响,并对比了不同诱导条件下,灵芝三萜关键酶基因的表达差异。结果显示三种诱导物均能提高灵芝三萜的含量。水杨酸提高了 FPS、SQS和LS基因的表达量,而钙离子和钙离子与水杨酸组合提高了 HMGS、HMGR、MVD、FPS、SQS和LS六个三萜关键酶基因的表达量。在三种诱导物下,SQS的基因表达量都是提高最多,我们推测SQS基因是灵芝三萜合成过程中重要的基因。