目的:研究蠲痛饮方对子宫内膜异位症(EMs)在位内膜间质细胞(ESC)增殖及凋亡的影响,同时观察蠲痛饮方对细胞TLR4/NF-κB信号通路中相关蛋白量表达的影响来阐明蠲痛饮方对子宫内膜异位症的治疗作用。方法:体外培养原代EMs患者在位内膜间质细胞(ESC),将第3-5代ESC作为实验研究对象:1、以蠲痛饮高、中、低剂量、西药孕三烯酮、中成药桂枝茯苓丸含药血清对ESC进行处理,倒置显微镜及透射电子显微镜(TEM)下观察细胞生长状况、细胞形态及超微结构的变化,采用CCK-8法检测含药血清作用24h、48h、72h后对细胞增殖的抑制情况并绘制细胞生长曲线;采用流式细胞仪(FCM)检测药物血清作用24h后对ESC细胞周期及凋亡的影响;2、采用蛋白印迹(Western Blot)法检测含药血清作用及经PDTC干预后细胞核中TLR4、NF-κB、IL-1蛋白表达水平的变化,采用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测细胞核中NF-κB与DNA结合能力。结果:1.细胞形态学的改变:各药物血清组细胞间连接、细胞形态、细胞核、细胞器等结构均有不同程度的改变,其中,中药高剂量组、中药中剂量组、西药组较为明显。电镜下细胞间分离,细胞表面凸凹不平,出现伪足样细胞突起,线粒体不同程度的扩张、肿胀或消失,嵴轮廓模糊,排列紊乱,空泡化,粗面内质网扩张,结构松散,附着核糖体减少,可见高尔基体复合物扩张,细胞核不规则,有凹陷性切迹,溶酶体出现,凋亡小体形成。2.细胞增殖抑制率的比较:各药物血清组的细胞增殖抑制率均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),其中蠲痛饮对细胞增殖的抑制作用呈时间-浓度依赖性,即蠲痛饮高剂量组的作用最显著,与西药组、中成药组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);3.细胞周期的变化:各药物血清组ESC从G1期到S期均不同程度的受到抑制,与空白组比,差异具有统计学意义(P<0.05),其中,蠲痛饮药物血清对细胞抑制作用呈浓度依赖性,即蠲痛饮高剂量组的作用最显著,与西药组、中成药组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);4.细胞凋亡的变化:各药物血清组对ESC细胞均有明显的促凋亡作用,与空白组比,差异具有统计学意义(P<0.05),其中,蠲痛饮药物血清对细胞的促凋亡作用呈浓度依赖性,即蠲痛饮高剂量组的作用最显著,与西药组、中成药组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);5.细胞核TLR4、NF-κB、IL-1蛋白表达的变化:各药物血清组对细胞核中TLR4、NF-κB、IL-1蛋白表达均有一定的抑制作用,与空白组比,差异具有统计学意义(P<0.05),其中,蠲痛饮药物血清对细胞核蛋白表达的抑制作用呈浓度依赖性,即蠲痛饮高剂量组的作用最显著,与西药组、中成药组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);经PDTC干预后,蠲痛饮高剂量药物血清仍可以降低TLR4、NF-κB蛋白的表达,却上调了IL-1蛋白的表达,差异具有统计学意义(P<0.05);6.细胞核NF-κB与DNA结合能力的变化:各药物血清组均可下调细胞核中NF-κB与DNA结合能力,与空白组比,差异具有统计学意义(P<0.05);其中,蠲痛饮高剂量组的下调作用最显著,经PDTC干预后NF-κB与DNA结合能力显著降低。结论:1.蠲痛饮药物血清组线粒体出现不同程度的扩张、肿胀,空泡化,粗面内质网扩张,结构松散,可见凋亡小体,细胞出现典型的凋亡征象,以蠲痛饮高剂量组细胞超微结构变化最为明显;2.蠲痛饮药物血清可以抑制细胞的增殖活性,细胞早期凋亡率增加,细胞周期随之发生相应改变,G1期细胞数增多,S期细胞数减少,G1期到S期发生抑制,以蠲痛饮高剂量组作用最为明显;3.蠲痛饮含药血清能够降低细胞核中TLR4、NF-κB、IL-1蛋白的表达,以蠲痛饮高剂量组作用最显著,并可以下调ESC中NF-κB与DNA的结合能力,抑制NF-κB的活性,降低NF-κB蛋白的表达,进而抑制炎症因子的表达,抑制异位内膜的侵袭、黏附、血管生成,最终达到治疗EMs的目的;4.蠲痛饮治疗EMs的机理可能是通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡及通过对调节TLR4/NF-κB信号通路蛋白的表达来实现的。