【摘 要】
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目的:构建反义RNA干扰组织因子(TF)在猪胰岛细胞的表达,观察抑制TF表达的胰岛细胞对移植后IBMIR发生程度的影响。方法:采用反义技术,设计5条反义RNA转染猪胰岛细胞,运用半定
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目的:构建反义RNA干扰组织因子(TF)在猪胰岛细胞的表达,观察抑制TF表达的胰岛细胞对移植后IBMIR发生程度的影响。方法:采用反义技术,设计5条反义RNA转染猪胰岛细胞,运用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量RT-PCR方法筛选对TF沉默效果最佳反义RNA;应用IBMIR体外模型,对沉默TF后的猪胰岛细胞在IBMIR体外模型中各项指标进行检测,从而了解IBMIR发生程度。结果:经PCR检测在5条反义RNA中抽取有沉默效果的oligoTF-1006、oligoTF-1009、oligoTF-114;该三种反义RNA转染胰岛细胞后,通过实时定量RT-PCR方法检测发现转染胰岛细胞后4天对TFmRNA的沉默效果达到最佳,分别为71.95%、59.63%、19.05%;根据PCR结果采用转染后4天的胰岛细胞加入体外IBMIR模型中,形成血凝块的质量较轻,血液各项指标显示这三组IBMIR的发生程度较空白转染对照组减轻。结论:TF作为启动凝血途径的重要因素,与胰岛细胞移植后IBMIR的发生存在一定关系,用反义RNA转染胰岛细胞抑制其表达,可以减低胰岛细胞移植后IBMIR的发生程度,有望在将来应用在临床上,减低移植物的丢失,提高移植后胰岛细胞存活率。
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