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【背景】肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,肝癌转移是肝癌相关性死亡的重要原因。迁移和侵袭是肿瘤细胞发生转移的重要环节,癌基因和抑癌基因的表达失调及肿瘤局部微环境的变化在这一过程中发挥关键作用。Annexin A2 (ANXA2)是一种Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,具有多种生物学功能。大量基因组学和蛋白质组学研究均已证实,ANXA2在多种恶性肿瘤中表达异常,参与细胞的恶性转化、肿瘤的侵袭、转移等过程,是一个重要的肿瘤相关分子[1]。3项不同国家不同时期的独立研究发现,ANXA2在肝癌组织中表达异常增高,参与了正常肝细胞向肝癌细胞的恶性转化过程,并提出ANXA2可能参与了肝癌的发生、发展的多个环节,但ANXA2在肝癌迁移、侵袭中的作用尚不明确[2-4]。本研究采用RNAi探索ANXA2对体外培养肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响。CD147是另一个重要的肿瘤相关分子,属于免疫球蛋白超家族成员,刺激多种基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)的分泌是该分子的主要功能之一。近年来的一些研究发现,肿瘤细胞可通过释放微囊泡的形式将CD147分子释放到胞外,实现肿瘤—间质间的交互作用[5]。而ANXA2的另一重要生物学功能是与质膜结构结合,参与包括质膜和微囊泡运输在内的多种膜相关事件[6, 7]。有文献报道,ANXA2分子与CD147分子可能存在相互作用,但这一假说并未得到进一步证实[8]。基于上述文献背景,我们提出ANXA2可能参与肝癌细胞荷-CD147微囊泡的释放,并通过这种方式参与调节肝癌细胞的迁移、侵袭。【目的】探讨ANXA2对体外培养肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响及作用机制。【方法】1) LipofectAMINETM 2000将siRNA转染人肝癌细胞SMMC-7721和FHCC-98;2) RT-PCR和Western Blot检测肝癌细胞中ANXA2的mRNA和蛋白表达水平,评价ANXA2特异性siRNA(si-ANXA2)的有效性;3)在Millicell小室中构建肝癌细胞(SMMC-7721和FHCC-98)与成纤维细胞(人胚肺成纤维细胞HPF-1)共培养体系,用小室迁移/侵袭实验研究ANXA2对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响;4)明胶酶谱实验探索肝癌细胞中ANXA2表达水平对肝癌细胞自身及成纤维细胞MMP-2表达量的影响;5)细胞免疫荧光法检测肝癌细胞中ANXA2和CD147的表达及分布情况;6)应用膜蛋白提取试剂盒提取肝癌细胞总膜蛋白,用提取的肝癌细胞总膜蛋白进行免疫共沉淀实验(分别用ANXA mAb和CD147 mAb包被Antibody Coupling Gel,以抗-JEV mAb作为对照);7)低温超速离心从肝癌细胞培养上清中分离微囊泡(microvesicles,MV),并进行电镜观察;8)对分离得到的MV进行Western Blot检测;9)对SMMC-7721细胞进行不同处理(转染snc-RNA、转染si-ANXA2、转染si-CD147),提取肝癌细胞培养上清中MV;10)通过Western Blot检测,分析肝癌细胞中ANXA2表达水平对荷-CD147 MV释放的影响;11)明胶酶谱探讨不同来源MV对成纤维细胞MMPs表达量的影响。【结果】1) si-ANXA能够有效沉默肝癌细胞中ANXA2的表达;2)沉默肝癌细胞中ANXA2的表达能够显著抑制与成纤维细胞共培养体系中肝癌细胞的迁移、侵袭能力;3)下调肝癌细胞中ANXA2的表达能够有效抑制肝癌细胞及培养于肝癌细胞培养上清中成纤维细胞MMPs的表达;4) ANXA2与CD147在肝癌细胞的细胞水平共定位(荧光双染);5) ANXA2与CD147在肝癌细胞膜结构中免疫共沉淀;6)肝癌细胞释放荷-CD147 MV;7) si-ANXA2或si-CD147转染肝癌细胞可下调MV中CD147表达;8)不同来源MV均有刺激HPF-1产生MMP-2的作用,将si-ANXA2或si-CD147转染肝癌细胞均可下调这种效应。【结论】1) ANXA2具有增强体外培养肝癌细胞迁移、侵袭能力的作用,ANXA2是参与肝癌发生、发展的一个重要分子;2) ANXA2通过调节肝癌细胞荷-CD147微囊泡的释放,调节间质成纤维细胞MMPs的分泌,实现肿瘤—间质间的交互作用,参与肝癌细胞迁移、侵袭的调控。