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表皮生长因子受体(EGFR)和Fms样酪氨酸激酶(FLT3)是两种重要的具有酪氨酸激酶活性的信号转导的跨膜受体。EGFR信号途径与肿瘤的发生、发展有着密切的关系。Fms样酪氨酸激酶(FLT3)在多种白血病的患者中非正常表达，它们在促进诊断与治疗肿瘤上具有非常重要的作用。巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是一种高效的外源蛋白基因表达系统，具有高表达、高稳定、高分泌、容易放大和成本低等优点，所以，选择毕赤酵母表达系统来表达EGFR和FLT3。EGFR和FLT3的基因片段分别克隆到pPICZαA中，并通过测序鉴定。构建好的pPICZαA-EGFR和pPICZαA-FLT3分别经过SacⅠ和BstXⅠ进行线性化后，电转化X33毕赤酵母中。用抗生素zeocin筛选阳性克隆，并筛选出多拷贝的菌株。筛选高表达菌株并优化培养条件，例如：诱导的时间，甲醇的诱导浓度，以及磷酸钾缓冲液(pH6.0)的影响。pPICZαA-EGFR/X33和pPICZαA-FLT3/X33经甲醇的诱导表达后，在培养液的上清液中有目标蛋白质的表达。经过SDS-PAGE电泳，EGFR分子量大小约为68 kDa，FLT3分子量大小约为58 kDa。EGFR的培养条件为28℃，诱导时间为84h，甲醇的诱导浓度为1.5％的条件下，表达量较高；FLT3的培养条件为28℃，诱导时间为96h，甲醇的诱导浓度为1.5％的条件下，表达量较高。重组蛋白经过硫酸铵沉淀浓缩后，过Ni-NTA亲和层析柱纯化EGFR和FLT3。