Neuropilin在髓系白血病细胞中的表达和作用的研究

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Neuropilin(NRP)作为细胞膜上的多功能受体。可参与神经细胞发育的调节。在血管内皮细胞,促使VEGF165与VEGFR2结合,参与调节血管形成和血管新生。NRP在多种肿瘤细胞系和肿瘤组织中表达。NRP作为VEGF165的受体,与其相互作用,在肿瘤细胞的生长、迁移、凋亡以及肿瘤组织的血管新生发挥重要作用。NRP包括NRP-1和NRP-2。NRP在血液系统疾病中的表达和作用研究甚少。本课题的研究目的:1)研究NRP-1和NRP-2在白血病细胞系中的表达,观察用siRNA干扰沉默NRP-1基因后对白血病细胞生长、增殖和迁移等生物学特性的影响。2)观察NRP-1和NRP-2在急性髓系白血病的表达及与临床特征的关系。 我们检测NRP-1和NRP-2在7种髓系白血病细胞系的表达。用siRNA干扰抑制HEL细胞的NRP-1基因表达后观察对其增殖和迁移的影响,结果发现NRP-1 mRNA在6/7种髓系白血病细胞系有不同程度的表达,NRP-2在3/7种白血病细胞系有表达。用siRNA转染24h、48h后NRP-1 mRNA表达明显减低,72h又恢复。转染24h后NRP-1蛋白表达也明显降低。转染后24h、48h和72h活细胞数和MTT值与对照组无差异,当用VEGF165诱导其增殖时,对照组在24h时增殖明显增加,而干扰组无明显增加。转染24h后干扰组细胞迁移显著减少(迁移细胞数:干扰组vs对照组:367+196 vs 80+15;加VEGF165趋化后:干扰组vs对照组:865±252 vs 130±60,p<0.05)。用流式细胞仪测定干扰后细胞黏附分子CD31、CD44、CD11b、CD49d的表达,与对照相比无明显变化。 用半定量RT-PCR检测NRP-1和NRP-2在24例急性髓性白血病患者骨髓单个核(MNC)的表达水平,与正常人比较,NRP-1表达阳性率明显增高,NRP-2的表达率与正常人相似。NRP-1和NRP-2多与VEGF、Flt-1共表达,KDR表达少见。用FAB分型,NRP-1和NRP-2的表达水平在各亚型中无差异,NRP-1和NRP-2的表达水平与临床特征如患者的性别、年龄、外周血白细胞数、血红蛋白、
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