丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用及机制

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目的:研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,探讨其作用机制,为TanⅡA应用于临床治疗卵巢癌提供理论依据。方法:MTT法检测人卵巢癌A2780细胞经TanⅡA药物处理后细胞的增殖情况,计算细胞抑制率=(1-实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%。实验重复三遍,取三次结果的平均值。然后以药物浓度为横坐标,以细胞抑制率为纵坐标,用Excel软件绘制出细胞生长抑制曲线,并用IC50计算软件计算出药物作用细胞的半数抑制率(IC50)。流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,实验分为空白对照组(对照组)和实验组。其中实验组依据4.0 mg/L TanⅡA作用于卵巢癌A2780细胞时间的长短不同,又分为24h组、48h组、72h组三个组。每个组均设3个平行样本。细胞以1×105的浓度接种到25cm2的培养瓶中。收集对照组和实验组的细胞,进行固定、染色,通过FCM检测细胞凋亡,定量测定细胞凋亡率。Western blotting法(按试剂盒说明书操作)分别检测对照组及实验组的细胞中Bcl-2及Bax两种蛋白表达变化情况。结果:1.TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞的增殖具有抑制作用,其作用强度随着药物作用时间及浓度的增加而增强,呈时间-剂量依赖性。TanⅡA作用A2780细胞48h的半数抑制率为7.78mg/L。2.流式细胞仪显示,经4.0 mg/L TanⅡA处理后,凋亡的卵巢癌A2780细胞明显增多。FCM定量显示0,24,48,72h的凋亡率分别为4.52%,19.7%,25.3%,40.40%。随着时间的延长,凋亡细胞增多,72h的凋亡率达到最高值,与对照组比较,24、48、72h药物作用组凋亡率增高有统计学意义(P<0.05)。3.Western blot检测各组细胞Bax及Bcl-2两种蛋白表达情况,结果表明与空白组相比,实验组中Bax的表达均有所增加,而Bcl-2的表达则有所减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比值明显下降。结论:1.TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用。2.TanⅡA诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2的表达,以及上调Bax的表达有关。
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