论文部分内容阅读
目的:本试验探究抗氧化剂槲皮素通过调控Nrf2-Keap1途径拮抗镉对大鼠生殖机能造成的应激损伤。通过体内试验对其机制进行深入研究,为研究镉的生殖毒性及槲皮素通过调控Nrf2-Keap1路径保护机体免受氧化损伤的研究奠定了基础。方法:通过分组饲养,定时灌胃处理,建立试验模型,4周之后取出睾丸组织,通过检验睾丸组织的谷胱甘肽过氧化酶(Gsh-Px),过氧化氢酶(CAT),超岐物过氧化物酶(SOD)等抗氧化酶水平,睾酮分泌量以及Nrf2-Keap1抗氧化通路相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶(Gsh-Px)、血红素加氧酶1(HO-1)、Y-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA及蛋白的表达量,进一步判定槲皮素作为抗氧化剂对染镉的干预作用。结果:1.通过对大鼠灌胃处理后,5天作为一个周期,对大鼠体重进行测定,发现染镉组大鼠体重明显低于空白组及槲皮素组,槲皮素组的体重和空白组的体重相比差异显著。槲皮素治疗组的大鼠体重测定值明显高于染镉组。2.通过对睾丸组织内必要的抗氧化酶检测,对试验数据进行分析发现,与空白组相比,染镉组丙二醛(MDA)活性明显升高(p<0.01),差异极显著,槲皮素组丙二醛活性低于空白组(p<0.01),槲皮素治疗组与染镉组比较,丙二醛活性低于染镉组(p<0.01)。多岐物过氧化物酶(SOD)活性,过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(Gsh-Px),染镉组与实验空白组相比,活性明显降低(p<0.01),槲皮素治疗组与染镉组相比,抗氧化酶的活性明显升高,差异极显著(p<0.01)。数据表明槲皮素对镉引起的机体损伤具有很好的缓和作用,促使机体的抗氧化反应能力增强。3.通过Elisa酶联免疫吸附试验测定发现,与空白组作比较,染镉组睾酮含量明显降低(p<0.01),槲皮素组的睾酮含量与空白组相比明显增加(p<0.01),槲皮素治疗组与染镉组相比,睾酮含量明显上升,差异显著(p<0.05)。证明槲皮素能够拮抗镉引起机体睾酮分泌量的减少,减弱对机体的损伤。4.通过对睾丸组织的HE染色镜检分析,发现与空白组相比,染镉组睾丸组织存在生精上皮生殖细胞大量脱落,各级生殖细胞数量减少,曲细精管中央伸长型精子细胞数量减少的现象,槲皮素治疗组部分生精上皮细胞损伤脱落,内皮细胞损伤情况不显著,这表示槲皮素对镉引起的大鼠睾丸组织损伤能够起到较好的缓解作用。5.通过q-PCR技术和Western Blot蛋白技术检测组织Nrf2抗氧化通路中Nrf2,HO-1,NQO1,Gsh-Px,γ-GCS,Keap1的mRNA和蛋白水平,发现与空白组相比,染镉组Keap1的mRNA和蛋白水平高于空白组(p<0.01),然而Nrf2,HO-1,NQO1,Gsh-Px,y-GCS的mRNA和蛋白水平明显低于空白组(p<0.01,p<0.05)。对于槲皮素治疗组,Keap1的表达水平明显低于染镉组(p<0.01),Nrf2,HO-1,NQO1,Gsh-Px,y-GCS水平高于染镉组(p<0.01,p<0.05)。结论:镉会损害大鼠睾丸组织的生精功能,降低睾丸组织对抗氧化反应的能力,造成生殖系统明显损伤,而槲皮素具有拮抗镉诱导损害作用的能力。槲皮素可以激活Nrf2-Keap1抗氧化通路,调节抗氧化酶的表达水平,干预镉损伤,证明槲皮素对镉造成的内源性氧化反应起到防御功能。