豆甾烷-3-酮-21-羧酸体外成骨活性的研究

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玉柏石松为石松科石松属植物,在我国传统的中医药中,被用于治疗关节疼痛和骨折,但其治疗骨折的药理学机制尚不清楚。本实验选用从玉柏石松中分离得到的甾体化合物豆甾烷-3-酮-21-羧酸(stigmastan-3-one-21-oic acid,以下简称SA)为实验材料,研究其对体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1活性的影响。  本研究的主要内容有:  (1) SA对MC3T3-E1增殖率的影响。  (2) SA对MC3T3-E1碱性磷酸酶活性的影响。  (3) SA对MC3T3-E1体外矿化的影响。  (4) SA对MC3T3-E1成骨分化相关基因mRNA表达的影响。这些基因包括:  a) AP-1家族基因(Fos亚家族:c-fos、Fra-1、Fra-2;Jun亚家族:Jun-D)。  b)成骨细胞早期分化相关基因:Runx-2、Osterix。  c)成骨基质蛋白基因:碱性磷酸酶ALP、I型胶原Col-I、骨桥蛋白OPN、骨涎蛋白BSP、骨钙蛋白OCN。  Alamar Blue实验结果表明:SA对MC3T3-E1细胞的增殖无明显影响。  SA对成骨细胞ALP活性研究实验的结果显示:8μmol/L和16μmol/L的SA处理细胞8天能抑制成骨细胞碱性磷酸活性。  茜素红染色结果表明:SA处理细胞16天能提高骨细胞矿化水平。  荧光定量PCR结果显示:SA抑制成骨早期分化相关基因(Runx-2和Osterix)的表达,促进骨基质蛋白OPN和相关转录因子(Jun-D,Fra-1和Fra-2)的表达。  所有结果显示:SA具有促进骨折愈合的成骨活性,其可能通过促进转录相关因子表达,骨折断面旧骨的吸收和骨基质矿化等方式完成。
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