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鸡马立克氏病(MD)是由马立克氏病病毒(MDV)引起的噬淋巴细胞肿瘤性疾病。前期miRNA 组测序结果显示 gga-miR-219b、gga-miR-130b-3p 和 gga-miR-140-3p 在鸡感染 MDV 的肿瘤样本中显著下调。本研究中,我们选取这3个miRNAs和MDV原癌基因Meq作为研究对象,研究它们在MD肿瘤形成过程中的作用机制。过表达或抑制gga-miR-219b的试验结果表明,该miRNA抑制MD淋巴细胞MSB1迁移,并通过促进细胞凋亡而不是阻滞细胞周期使细胞增殖发生抑制,抑制细胞侵袭相关基因MMP2和MMP9的表达。这表明gga-miR-219b在MD肿瘤发生过程中发挥抑制作用。通过Targetscan和miRDB预测gga-miR-219b的候选靶基因,双荧光素酶基因报告试验证明B细胞慢性淋巴细胞性/淋巴瘤11B(BCL11B)是gga-miR-219b的一个直接靶基因。利用RNA干扰技术抑制BCL11B的表达,MSB1细胞增殖、迁移和侵袭情况与过表达gga-miR-219b结果类似,说明BCL11B基因在MD肿瘤转化过程中起到促进作用。过表达gga-miR-219b或干扰BCL11B基因表达,抗凋亡基因BCL2和BCL2L1表达下调,促凋亡基因TNFSF10表达上调,这说明gga-miR-219b能够通过介导凋亡通路中的基因表达促进细胞凋亡。此外,gga-miR-219b和BCL11B能够影响MDV最重要的原癌基因Meq表达。Meq基因在马立克氏病肿瘤组织和马立克氏病T类成淋巴细胞系中高表达。为研究Meq基因在MD肿瘤转化过程中的作用机制,我们利用RNA干扰技术抑制Meq基因表达,分析Meq基因干扰对MSB1细胞的生物学效应。在MSB1细胞中,Meq基因的干扰效率达到70%。干扰Meq基因表达后细胞增殖发生显著抑制,凋亡蛋白酶6活性升高,然而细胞周期没有明显变化。进一步研究结果表明Meq基因干扰后,凋亡通路中BCL2基因表达显著降低。干扰Meq基因对细胞迁移没有明显影响,而MMP2和MMP9基因表达显著降低。干扰Meq基因可以影响MD肿瘤细胞增殖、凋亡和侵袭等特征,说明Meq基因在肿瘤细胞转化过程中发挥促进作用。为解析gga-miR-130b-3p在感染MDV的肿瘤组织中低表达的原因,我们分析了感染MDV肿瘤化脾脏和未感染脾脏中gga-miR-130b-3p编码基因上游区域的差异甲基化水平。针对gga-miR-130b-3p基因上游1kb范围设计2个扩增子,覆盖616bp。这一区域有48个CpG位点,其中有8个位点在肿瘤化脾脏中的甲基化水平显著高于未感染脾脏。与未感染脾脏相比,肿瘤化脾脏中DNA甲基化转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b表达上调,去甲基化相关酶Tet 10-11转位蛋白2(TET2)表达显著下调。Gga-miR-130b-3p编码基因上游区域发生甲基化或许是造成其在MD肿瘤组织中表达下调的直接原因。过表达gga-miR-130b-3p显著抑制细胞增殖、迁移和侵袭相关基因的表达,表明gga-miR-310b-3p在MD肿瘤转化过程中发挥抑制作用。与阴性对照组相比,转染gga-miR-140-3p激动剂后,细胞增殖发生显著抑制,细胞迁移数也显著减少。MMP2在转染后24h表达显著下调,48h和72h表达极显著下调,MMP9基因在转染后48h表达显著下调。gga-miR-140-3p作为在MDV感染组织中异常表达的miRNA,影响MD肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,提示该miRNA可能参与MD肿瘤转化过程。综上所述,通过影响鸡MD肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭等细胞生物学特征,gga-miR-219b、gga-miR-130b-3p和gga-miR-140-3p在MD肿瘤形成过程中发挥抑制作用,而gga-miR-219b的靶基因BCL11B和MDV原癌基因Meq在这一过程中发挥促进作用。