【摘 要】
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目的:环状RNA CDR1as影响着多种肿瘤的进展,环状RNA CDR1as与IGF2BP3作为影响肿瘤的因子,二者关系在上皮性卵巢癌研究较少。本研究的目的就在于探讨环状RNA CDR1as对上皮性卵巢癌细胞增殖和迁移功能的影响,RNA结合蛋白IGF2BP3对上皮性卵巢癌细胞增殖和迁移功能的影响,以及环状RNA CDR1as是否通过影响IGF2BP3/c-Myc轴调控上皮性卵巢癌细胞的恶性行为。方
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目的:环状RNA CDR1as影响着多种肿瘤的进展,环状RNA CDR1as与IGF2BP3作为影响肿瘤的因子,二者关系在上皮性卵巢癌研究较少。本研究的目的就在于探讨环状RNA CDR1as对上皮性卵巢癌细胞增殖和迁移功能的影响,RNA结合蛋白IGF2BP3对上皮性卵巢癌细胞增殖和迁移功能的影响,以及环状RNA CDR1as是否通过影响IGF2BP3/c-Myc轴调控上皮性卵巢癌细胞的恶性行为。方法:首先利用circ Base数据库中环状RNA CDR1as的基因信息用软件设计跨越CDR1as剪接位置的上下游引物。利用克隆载体构建技术合成CDR1as相关表达载体质粒。利用q RT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳实验和Sanger测序来验证引物、质粒是否正确。同样利用q RT-PCR分析上皮性卵巢癌细胞A2780和SKOV3与人正常卵巢癌上皮细胞IOSE-80中环状RNA CDR1as表达差异。使用Kaplan-Meier plotter数据库分析IGF2BP3蛋白水平对卵巢癌患者总生存期的影响。利用RNA干扰技术构建靶向CDR1as、IGF2BP3、c-Myc的小干扰RNA（si RNA）。通过CCK8实验和Transwell实验研究调控基因表达对细胞增殖和迁移的影响。通过Western Blot实验检测基因调控后IGF2BP3和c-Myc蛋白水平的变化。利用RNA结合蛋白免疫沉淀实验（RIP）研究IGF2BP3蛋白与研究的RNA是否相互作用。利用药物抑制实验抑制IGF2BP3/c-Myc轴探讨对上皮性卵巢癌细胞增殖的影响。结果:1.与正常卵巢上皮细胞IOSE-80相比,上皮性卵巢癌A2780细胞中CDR1as表达量高,上皮性卵巢癌细胞SKOV3中CDR1as表达量低。在A2780细胞中敲低CDR1as可导致细胞增殖和迁移功能增加;SKOV3细胞中过表达CDR1as可导致细胞增殖和迁移功能减弱。2.Kaplan-Meier plotter数据库中IGF2BP3蛋白水平高的卵巢癌患者总生存期短（p＜0.01）。在上皮性卵巢癌细胞A2780和SKOV3中敲低IGF2BP3可导致增殖和迁移能力减弱。3.在A2780细胞中敲低CDR1as后c-Myc蛋白表达水平升高。在SKOV3细胞中过表达CDR1as后c-Myc蛋白表达水平降低。在A2780和SKOV3细胞中敲低IGF2BP3后c-Myc蛋白表达水平均降低。4.RIP实验提取与IGF2BP3蛋白结合的RNA通过q RT-PCR实验、琼脂糖凝胶电泳和Sanger测序分析发现其与CDR1as和c-Myc结合。5.在A2780细胞中敲低CDR1as组c-Myc蛋白水平和增殖率高于同时敲低CDR1as和c-Myc组（p＜0.05）。用IGF2BP3/c-Myc轴抑制剂JQ-1处理SKOV3细胞的IC50为0.508n M,c-Myc蛋白表达明显降低。结论:环状RNA CDR1as抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖和迁移能力。高表达IGF2BP3的卵巢癌患者总生存期短,敲低IGF2BP3后上皮性卵巢癌细胞的增殖和迁移能力减弱。环状RNA CDR1as可通过竞争结合IGF2BP3来抑制c-Myc表达进而抑制卵巢癌细胞增殖和迁移。
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