二氯醋酸二异丙胺,吡格列酮及肾上腺髓质素对内皮细胞功能影响的体外研究

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目的 1.探讨二氯醋酸二异丙胺(DIPA),吡格列酮(PIO)及肾上腺髓质素(AM)对内皮细胞(EC)功能指标细胞凋亡率,上清液一氧化氮(NO)浓度及可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)水平的影响;2.观察DIPA,PIO及AM对EC蛋白激酶C(PKC)亚型PKCα、PKCδ的表达的影响,了解其可能的作用机理。 方法 以体外原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为靶细胞,对DIPA,PIO及AM进行了以下方面的研究:1.对高糖诱导的血管EC功能紊乱的影响:(1)流式细胞仪检测EC凋亡峰;(2)硝酸还原酶法测定上清液NO浓度;(3)双抗体夹心ABC-ELISA法测定上清液中sICAM-1水平;2.对PKC亚型PKCα、PKCδ表达的影响:(1)用激光共聚焦显微镜观察在高糖作用及药物干预下HUVECs胞内PKCα、PKCδ表达变化,以探讨PKCα、PKCδ的位置变化在影响EC功能中的作用;(2)运用Western Blotting杂交技术观察高糖作用及药物干预后的HUVECs中PKCα、PKCδ蛋白水平的变化,以定量探讨PKCα、PKCδ在影响EC功能中的作用;3.用改进的DPN诱导分析法检测DIPA对HUVECs中丙酮酸脱氢酶(PDH)活性的影响。实验分组:(1)正常对照组;(2)高浓度葡萄糖培养组:加入葡萄糖浓度为30mM:
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