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苹果炭疽病是苹果果实主要病害之一,可造成生长期和贮藏期果实腐烂。本研究室前期研究显示炭疽菌在离体接种条件下可以侵染苹果叶片。本研究通过室内和田间接种后的组织学观察,田间自然条件下叶片带菌检测等分析了苹果叶片在病害循环作为初侵染源的作用,主要取得以下结果。室内离体苹果叶片接种发现胶胞炭疽菌和尖胞炭疽菌均能侵染叶片,7-10天表现症状,并产生橘红色粘孢子团。显微观察发现:两种菌分生孢子均能在叶面萌发,产生芽管,芽管上形成附着胞,在分生孢子及芽管能够产生次生分生孢子。随着侵染的完成,分生孢子、芽管、附着胞逐渐消解,最后仅残留穿透孔于叶面。两种菌在附着胞产生数量及芽管生长速率方面存在一些差异。田间叶片接种发现,从8月接种到生长后期(11月)落叶时一直未表现症状。显微观察表明两种炭疽菌分生孢子均能在叶片表面萌发形成附着胞、侵染钉,附着胞脱落后形成残留的穿透孔。分生孢子及芽管上也可以形成次生分生孢子。对未发病接种叶片采用百草枯处理发现叶片均已感染,表明它们以潜伏侵染方式存在于寄主组织中。通过组培苹果叶片的接种试验,发现胶胞炭疽菌可侵染幼叶,接种后4d即可表现症状。组织学观察显示,侵入后在寄主表皮细胞中侵染孔处形成膨大、不规则的侵染泡囊;从侵染泡囊上分化出较宽的初生菌丝,初生菌丝扩展至周围细胞,在通过细胞间的细胞壁处菌丝明显缢缩;在健康和褐变叶片的表皮细胞中观察到侵染泡囊和初生菌丝,此过程即是活体营养阶段。在褐变组织的叶肉细胞观察到较细的次生菌丝,健康组织的叶肉细胞内未观察到次生菌丝存在,表明病原菌从活体营养转变为死体营养。这些结果显示胶孢炭疽菌在苹果叶片中属于典型的细胞内半活体营养型。为了了解田间自然条件下叶片带菌情况,从常规管理果园采集健康叶片,采用百草枯处理后保湿诱导孢子产生、分离培养,结果显示健康叶片带菌率达14%,表明在自然条件下苹果叶片带菌率很高。通过形态学及ITS核苷酸序列系统发育鉴定,分离得到的14菌种中,13株归为为胶胞炭疽菌复合群C. gloeosporioides complex,1株归属尖胞炭疽菌复合群C. acutatum complex。以上研究发现引起苹果果实炭疽病的病原胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌,在自然条件下能够侵染苹果叶片,在侵入前能够产生产生分生孢子,可以作为直接的田间再侵染源。侵入寄主后以潜伏侵染方式存在于健康叶片中,在来年可以作为田间的初侵染来源。