龙眼SVP基因的克隆及功能研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:blademan_0617
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本试验以‘四季蜜’、‘立冬本’龙眼嫁接新梢及‘红核子’龙眼叶芽为材料,研究不同龙眼品种中SVP同源基因序列的差异(包括基因序列的可变剪切)及表达差异,探究龙眼SVP同源基因在龙眼的成花调控网络中(包括花芽分化和幼年期调控)的作用。本试验主要获得了以下研究结果:1.荧光定量PCR验证龙眼13个成花调控基因在‘四季蜜’和‘立冬本’嫁接新梢中表达的差异。结果表明,GI与FKF1基因在‘四季蜜’中均表达升高,SVP、 FLC、 EMF2的同源基因在‘四季蜜’中表达降低。龙眼中的TFL1同源基因TFL1(6O27)与TFL1(6475)变化趋势不同,TFL1(6027)在‘四季蜜’中的表达稍高于‘立冬本’,而TFL1(6475)在‘四季蜜’中表达降低。LFY、AP1与SOC1基因在两个品种中的表达差异不明显。2.以‘四季蜜’龙眼嫁接新梢及‘红核子’龙眼叶芽为试验材料,克隆龙眼中的SVP同源基因,得到‘四季蜜’龙眼中SVP645基因的7个不同拷贝序列、SVP2719的7个可变剪切序列,‘红核子’龙眼中SVP645基因的7个不同拷贝序列、SVP2719的4个可变剪切序列。分析各序列,发现龙眼SVP645基因的大多数拷贝在‘红核子’和‘四季蜜’中序列存在差异;SVP2719基因在‘四季蜜’和‘红核子’中的碱基序列基本无差异,编码区氨基酸序列完全一致。3.荧光定量PCR分析两个龙眼SVP同源基因在‘红核子’品种中花芽分化过程的表达。结果显示,在1月份龙眼花芽开始形态分化的时候,SVP645基因的表达达到顶峰,而SVP2719基因表达却开始下降,表明SVP645与SVP2719基因可能具有不同的功能,SVP2719功能可能与抑制花芽分化有关。4.选择‘四季蜜’中SVP2719的S-1和S-6号基因序列构建重组表达载体,根癌农杆菌介导转化本氏烟草。结果发现龙眼SVP2719-S1基因使烟草的花蕾形状发生了变化,花蕾畸形,不能正常成花;SVP2719-S6基因使烟草的花朵形状发生了变化,花瓣畸形,但花瓣数、萼片、雌蕊、雄蕊无变化。
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