AD相关基因tau在斑马鱼中的表达图谱研究

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老年痴呆,也叫阿尔兹海默症(Alzheimersdisease,AD)是神经系统的退行性疾病。目前,AD已成为导致老年人死亡的第四位主要原因,仅次于心脏病、癌症及中风。因此,老年痴呆成了世界各国予以攻克的瞩目问题。Tau蛋白的异常高度磷酸化是出现PHFs/NFTs的主要原因,导致神经纤维内微管解聚、变形、扭曲、退化,从而引起老年痴呆。   目前Tau基因已成为阿尔兹海默相关基因的研究热点,但是tau基因在斑马鱼中的表达未见报道。为研究斑马鱼tau基因的时空表达,确定药物作用靶点,本文选用整体原位杂交的方法,研究tau基因在斑马鱼胚胎中的时空表达图谱。采用RT-PCR技术,克隆得到tau基因片段,693bp,连接到PGEMT-easy载体上,转化到大肠杆菌中,运用菌落PCR鉴定阳性克隆。氨基酸序列分析表明,与人、家鼠、爪蟾的同源性分别达到65%,63%,57%。通过体外转录获得地高辛标记的RNA探针,对各时期胚胎进行原位杂交,结果显示tau基因在斑马鱼的早期均一表达,18体节之后集中在中后脑表达,三天后的斑马鱼中没有明显表达。用红色荧光蛋白标记islet的RNA探针,用绿色荧光蛋白标记tau的RNA探针,原位杂交,用荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合,荧光显色剂显色后在荧光显微镜下观察,准确定位了tau基因的表达位置在中后脑,与islet表达的细胞不同。   初步筛选了影响该基因表达的两种中药标准品,虽然效果不明显,但为后期研究该基因的功能和药物高通量筛选打下了基础,并对后期实验做出展望和计划。
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