过量乳酸杆菌在小鼠生殖道的致病性研究

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目的:通过对解脲支原体血清型1(Uu1)及过量乳酸杆菌DM8909在小鼠生殖道的定植率及致病率的对比研究,探讨过量乳酸杆菌在小鼠生殖道是否同样具有致病性。方法:将156只雌激素预处理过的ICR(Institute of Cancer Research,国际通用的封闭群小鼠)小鼠随机分为6组(其中A-E为实验组,A、B两个实验组每组36只,C、D、E三个实验组每组24只,对照组F组12只),A、B阴道接种浓度107copy/g的Uu1及Uu1和德氏乳酸杆菌DM8909(1012cfu/ml)的混合液,C、D、E三组小鼠阴道分别接种106,109,1012cfu/ml的乳酸杆菌菌液,F组为对照组,接种Uu无菌培养液及乳酸杆菌液体培养液MRS。接种后第1、3、7、14、21、28天随机抓取相应个数的小鼠,处死前取B-E组小鼠阴道分泌物行乳酸杆菌的定量活菌计数,处死后取宫颈管分泌物行Uu1的荧光定量聚合酶链合反应(FQ-PCR)检测及(或)乳酸杆菌的定量活菌计数(Cfu/ml)作对比研究。取宫颈、子宫内膜及输卵管行HE染色光镜观察,于接种后第14天的小鼠宫颈管粘膜及子宫内膜行扫描电镜观察。结果:1)ICR小鼠宫颈管Uu感染阳性率:A组52.8%(19/36),B组27.2%(10/36),差异有统计学意义(P=0.032)。随着接种后时间的延长,阳性率呈下降趋势,其中接种后第一天达高峰,A组、B组的阳性率分别为:100.0%(6/6),83.3%(5/6),至第28天均无检出。对照组均无Uu1检出。2)Uu定量值:2个实验组在接种后第1,3天,宫颈管Uu1FQ-PCR值差异具有统计学意义(P<0.05),B组Uu1定量值明显低于A组的Uu1的定量值。2个实验组随着接种后时间的延长,宫颈管Uu1FQ-PCR定量值呈下降趋势;其中第1天达高峰,A、B组定量均数分别为:1.99×107,9.33×104。3)DM8909阴道定量值:正常对照组小鼠阴道平均定量值为5.13×103Cfu/ml,B-E组不同浓度的乳杆菌DM8909菌液可呈剂量依赖地提高小鼠阴道内的乳杆菌含量,接种后乳酸杆菌在小鼠阴道的平均定量值以接种后第3天或第7天达最大值,E组小鼠阴道的DM8909定量值与B组相比,每一时间点DM8909阴道的定量值都有统计学意义,及E组小鼠阴道的DM8909值远远大于B组小鼠阴道的DM8909的定量值。4)DM8909宫颈定量值:B组在接种后第3天,平均定量值达最高为8.13×107Cfu/ml,C、D、E组在接种后第7天平均定量值达最高,分别为1.86×104,4.68×106,1.32×109Cfu/ml。小鼠阴道接种1012Cfu/ml的乳酸杆菌的E组与混合组B组相比,接种后每一时间点,DM8909定量值都有统计学意义(P<0.05),及E组的乳酸杆菌平均定量对数值均高于混合组测得的乳酸杆菌平均定量对数值。小鼠阴道的定植量平均要大于小鼠宫颈的1-2个数量级。5)致病率:接种后第3-28d,A组、B组总致病率分别为:53.3%(16/30),13.3%(4/30),差异有统计学意义(P=0.001);每一时间点,两个实验组的致病率不同,A组的致病率高于B组。对照组无致病。结论:1)阴道乳酸杆菌能够干扰Uu1在宫颈管柱状上皮的定植,降低Uu感染阳性率及Uu在小鼠宫颈的定量值,降低Uu致病性。2)小鼠阴道接种的Uul可能对乳酸杆菌有抑制作用。3)乳酸杆菌可以定植宫颈上皮细胞。4)乳酸杆菌在小鼠阴道的定植率高于宫颈上皮细胞。5)过量乳酸杆菌在小鼠生殖道未发现像Uu1一样明显的致病性。
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