蛹虫草多肽对百草枯所致人胚肺成纤维细胞MRC-5过氧化损伤的保护作用

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百草枯是一种高效的除草剂,由于其廉价且除草效果显著而被广泛使用。百草枯毒性剧大,且无特效解毒剂,研究认为氧自由基损伤是百草枯中毒的机制之一。蛹虫草多肽具有清除氧自由基的作用,本实验拟通过百草枯诱导人胚肺成纤维细胞损伤,观察蛹虫草多肽的抗氧化作用及抗细胞凋亡作用,为百草枯中毒的解救提供新的治疗方法。目的:观察蛹虫草多肽对百草枯作用下的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)存活率的影响,对MRC-5细胞中SOD、GSH-Px酶活性的影响以及抗凋亡作用,探讨蛹虫草多肽对百草枯中毒后的治疗作用。方法:通过酶解法提取蛹虫草多肽。然后分组给药:1)对照组:MRC-5细胞常规培养;2)模型组:加入终浓度为1mmol/L的百草枯;3)实验组1:加入终浓度为1mmol/L的百草枯+5mg/ml的蛹虫草多肽;4)实验组2:加入终浓度为1mmol/L的百草枯+10mg/ml的蛹虫草多肽;5)加入终浓度为1mmol/L的百草枯+20mg/ml的蛹虫草多肽。采用百草枯诱导建立细胞模型,应用MTT法检测细胞存活率,通过检测细胞培养液中SOD、GSH-Px活性及MDA含量,来确定蛹虫草多肽多过氧化损伤MRC-5细胞的保护作用。Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒进行对MRC-5凋亡细胞的检测,WB法检测bax、bcl-2蛋白表达来观察蛹虫草多肽对MRC-5细胞凋亡的阻碍作用。结果:1mmol/L百草枯孵育24小时可显著诱导MRC-5细胞损伤,导致细胞存活率下降到27.58%细胞经浓度的蛹虫草多肽与百草枯共同作用后,特别是虫草多肽20mg/ml组可使细胞存活率升高到45.97%,同时增加蛹虫草多肽浓度,可促进受损的MRC-5细胞修复,提高SOD、GSH-Px酶活性,降低MDA含量。通过Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒对各实验组细胞进行凋亡检测,结果显示模型组与对照比相比,MRC-5的早期凋亡、晚期凋亡及总体凋亡率明显增高(P <0.05);3个剂量的蛹虫草多肽处理组的MRC-5细胞的早期凋亡、晚期凋亡及总体凋亡率较模型组明显下降;蛹虫草多肽20mg/ml处理组的MRC-5细胞的早期凋亡、晚期凋亡及总体凋亡率明显降低。WB法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2表达情况,结果显示模型组bcl-2蛋白表达含量明显低于对照组,而Bax蛋白表达明显高于对照组;5mg/ml蛹虫草多肽处理组bcl-2蛋白表达含量明显高于模型组,20mg/ml蛹虫草多肽处理组bcl-2蛋白表达含量明显高于5mg/ml组和10mg/ml组,而Bax蛋白表达明显低于5mg/ml组和10mg/ml组。结论:蛹虫草多肽可显著提高MRC-5细胞中SOD、GSH-Px酶活性,降低MDA含量,对百草枯诱导的MRC-5过氧化损伤具有明显的保护作用。同时虫草多肽对百草枯所致人胚肺成纤维细胞MRC-5过氧化损伤后的细胞凋亡具有良好的拮抗作用,来达到肺保护的作用。
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