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第一部分:mCRC患者CEA水平与西妥昔单抗疗效分析【目的】探讨mCRC患者初始治疗前血CEA水平与西妥昔单抗治疗疗效的相关性。【方法】收集并整理2013-2015年在武汉协和医院肿瘤中心接受西妥昔单抗联合化疗的mCRC患者信息资料,以西妥昔单抗治疗前CEA10ng/ml为界分为CEA升高组和CEA正常组,回顾分析mCRC患者临床病理特征与西妥昔单抗治疗疗效及生存预后的关系。【结果】按照入选标准筛选患者,共纳入20例mCRC,其中CEA升高组13例,CEA正常组7例。CEA升高组接受西妥昔单抗治疗后疾病控制率(DCR)高于CEA正常组(92%VS 28%),组间差异具有统计学意义(Fisher精确检验,P=0.007);而性别、年龄、肿瘤原发灶部位、转移范围与DCR无明显相关。CEA升高组总生存期(OS)均值及中位数(个月)均高于CEA正常组(18.7 VS 14.2,18 VS 9),组间差异无统计学意义(Log rank检验,P=0.339);CEA升高组无病生存期(PFS)均值及中位数(个月)均高于CEA正常组(7.6VS5,7VS0),组间差异无统计学意义(Log rank检验,P=0.334)。【结论】mCRC患者治疗前CEA升高组较CEA正常组在接受西妥昔单抗治疗后获得较好的DCR。比较患者接受西妥昔单抗治疗后OS、PFS的均值和中位数,治疗前CEA升高组较CEA正常组均高,但差异无统计学意义。第二部分:EGF对LOVO细胞增殖的影响及其与CEA表达相关性分析【目的】观察EGF对多种CRC细胞促增殖作用及其与细胞CEA表达相关性。【方法】MTT法检测EGF对6种CRC细胞系增殖的影响;裸鼠移植瘤模型验证EGF对CRC细胞的促增殖作用;免疫印迹技术和实时PCR分别检测细胞CEA在蛋白质和m RNA水平的表达情况;免疫印记技术检测EGF刺激CRC细胞系后,CEA和核内转录调控因子CEAR表达水平的变化;免疫组织化学技术检测皮下移植瘤组织CEA的表达情况;利用si RNA技术抑制EGFR表达后,免疫印记检测其对EGF促进细胞CEA表达及AKT、ERK磷酸化的影响。【结果】EGF刺激LOVO的增殖效应显著,呈剂量依赖性,且从紧密连接的上皮细胞样变为离散的梭形间质细胞样形态,而其它CRC细胞无明显增殖效应,形态学无明显变化;EGF刺激LOVO皮下移植瘤增殖效应显著,呈时间及剂量依赖性,EGF浓度为500μg/kg/d时达到最大增殖效应;仅LOVO细胞在m RNA和蛋白质水平均有CEA高表达;EGF能促进LOVO细胞CEA表达上调,并伴有CEAR表达下调;EGF实验组皮下移植瘤组织CEA表达量明显高于对照组;抑制LOVO细胞EGFR的表达后,可阻断EGF对LOVO细胞CEA表达的促进作用及AKT、ERK的磷酸化激活。【结论】EGF仅对在m RNA和蛋白质水平均有CEA高表达的LOVO细胞有明显的促增殖作用,并伴随间质细胞样形态改变,而对SW620、SW480、HT29、HCT116和CACO2细胞的增殖及形态学改变无明显影响;EGF能促进LOVO细胞CEA表达,并伴有CEAR下调;EGF通过EGFR诱导LOVO细胞AKT、ERK磷酸化和促CEA高表达。第三部分:EGF对LOVO细胞增殖的影响及其与RAS、EGFR状态相关性分析【目的】观察EGF对CRC细胞促增殖作用的大小及其与细胞RAS突变和EGFR表达的相关性。【方法】对6种CRC细胞进行RAS和BRAF基因测序;予以EGF刺激后,免疫印记检测CRC细胞的AKT、ERK磷酸化状态;检测6种CRC细胞EGFR表达状态。【结果】LOVO和HCT116为KRAS G13D突变,SW620和SW480为KRAS G12V突变,HT29和CACO2均无RAS、BRAF突变;除SW620外,LOVO、SW480、HT29、HCT116和CACO2细胞均有EGFR高表达,而且接受EGF刺激后,LOVO、SW480、HT29、HCT116和CACO2细胞AKT、ERK发生磷酸化激活。【结论】EGF刺激LOVO高增殖活性与RAS突变状态无明显相关性;EGF刺激CRC细胞AKT、ERK磷酸化激活与RAS和BRAF突变状态无关,而与EGFR表达相关;EGF刺激LOVO高增殖活性与EGFR表达无明显相关性。