麦醇溶蛋白作为小麦胚乳中重要的贮藏蛋白，其组成和含量对小麦面粉的烘烤品质具有重要影响。醇溶蛋白的高效分离鉴定和编码基因的定向克隆，是研究麦醇溶蛋白及其与品质关系的可靠途径，并为基因工程改良小麦品质提供新的基因资源，从而推动小麦品质改良工作。 小麦贮藏蛋白的研究是伴随着分离技术的发展而不断深入的。随着现代生物技术的发展以及一些先进的分离手段的出现，大大促进了对小麦种子蛋白质的结构与功能研究，其中反相高效液相色谱(RP-HPLC)和生物质谱技术的发展为我们提供了贮藏蛋白快速分离与定量以及精确确定其分子量的有效方法。本研究的主要目的旨在建立贮藏蛋白高效分离鉴定的反相高效液相色谱和生物质谱方法，同时，利用AS-PCR方法分离克隆醇溶蛋白编码基因，主要研究结果如下： ● 贮藏蛋白RP-HPLC分离鉴定 本研究系统分析了柱温、洗脱梯度、样品量、提取时间和上样体积等因素对RP-HPLC分离分析的影响，以反相色谱柱(ZORBAX 300SB-C18 Stable Band Analytical 4.6x250mm，5-Micron)和Aglient 1100高效液相色谱系统，建立了适合小麦贮藏蛋白分析的反相高效液相色谱技术体系，主要参数包括：柱温50℃、流速1.00ml／min、进样量5μl、洗脱梯度55分钟内乙腈浓度由21％升到48％(v／v)。分析发现HMW-GS中1Ax1、1Bx6、1Bx7、1Bx13、1Bx14、1Bx17、1Dx2、1Dx5、1By8、1By18、1Dy10、1Dy12等均能用该体系进行较好的分离，而1Dx2和1By15、1Dx5和1By15、1Dx2和1By20等亚基较难分离开，1Dx5和1By9、1Dx5和1By18、1Dx2和1By16等亚基用该体系很难分离鉴定。此外，该方法可对优质醇溶蛋白γ45亚基进行有效的分离和鉴定。本研究结果表明，RP-HPLC可作为小麦品质改良中杂种早期世代优质亚基鉴定筛选的可靠方法。 ● 醇溶蛋白MALDI-TOF-MS鉴定 本研究对小麦醇溶蛋白基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定技术进行了优化，初步摸索出一套样品用量少、操作简便快速、适合高通量分析的技术体系。分析结果表明，15-20mg小麦种子样品足够进行质谱鉴定，研磨后用70％乙醇抽提15分钟后离心，上清即可用于质谱检测。图谱显示，不同醇溶蛋白组分分辨度较好，图谱清