N-乙酰-L-半胱氨酸对脂肪来源干细胞增殖与白介素-8分泌影响的实验研究

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目的脂肪来源干细胞(ADSCs)因能分泌多种生长因子在烧伤创面的修复再生中有巨大应用前景,但其产生的炎症因子,如IL-8,可能造成创面的加深,抑制创面愈合。N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)作为化痰药在呼吸道疾病中有广泛用途,并可促进多种细胞的增殖,抑制其凋亡,另外还被证实它可以调节多种炎症因子如IL-8,TNF-α的表达。本文的研究目的是探索N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)是否会对ADSCs增殖、凋亡及分泌白介素-8(IL-8)的功能产生影响。方法从人脂肪组织中分离、培养ADSCs,使用流式细胞术与免疫荧光技术鉴定细胞表型,确定其为脂肪来源干细胞。在含或不含NAC的培养环境下,使用CCK-8检测ADSCs是增殖速度,流式细胞术检测ADSCs死亡率,以rt-PCR和ELISA测定IL-8的mRNA及蛋白表达水平。结果ADSCs细胞呈成纤维细胞样。流式细胞检测提示CD90、CD44、CD13、CD105高表达,CD14、CD71、CD34、CD45低表达。免疫荧光结果显示CD44、CD105高表达, CD34、CD45低表达,表明其为干细胞。40μg/ml NAC处理组第8天细胞光密度为1.217±0.165,对照组为0.794±0.031,处理组为对照组1.53倍(P<0.05)。NAC处理后ADSCs凋亡率与对照组相比降低了55.4%,从3.2%下降到1.65%(P<0.01);坏死率下降了48.8%,从7.65%下降到3.41%(P<0.01)。NAC处理组IL-8mRNA表达水平下降到对照组的46.2±8.7%(P<0.01)。NAC处理组中IL-8水平为269.34±43.58pg/ml,对照组2690.26±371.09pg/ml,处理组为对照组9.98±0.57%(P<0.01)。结论从脂肪组织中可以成功分离、培养出ADSCs。NAC能促进ADSCs增殖,抑制凋亡,并抑制IL-8表达,在应用ADSCs的烧伤创面的修复再生中,NAC可能有保持移植的ADSCs数量,减轻创面炎症的作用。
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