抗S.paratyphi AO2抗原单克隆抗体制备及胶体金免疫层析试纸条的研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:FuSoo
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
甲型副伤寒沙门氏菌是一种在公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病原菌。可以引起腹泻症状或者致死。目前,检测该菌的方法主要包括:传统检测方法、免疫学检测方法、分子生物学检测方法和仪器检测方法。传统检测方法准确,但耗时长,对实验员的操作能力要求较高;分子生物学检测方法灵敏、快速、特异性强,但需要较高的成本和较高的专业技术;仪器检测方法快速,但需要的成本高,另外,也需要比较庞大的数据库,对于一些少见或者新出现的菌无法检测;免疫学检测方法具有快速、操作简便、灵敏等优点因而在致病菌的检测中广泛使用。本研究采用甲型副伤寒沙门氏菌菌体作为免疫抗原,分别制备出抗甲型副伤寒沙门氏菌多克隆抗体和单克隆抗体,另外,在此基础上通过对胶体金、金标抗体和免疫层析的研究,制备疫层析试纸条,为甲型副伤寒沙门氏菌的快速检测提供了基础。本研究的研究内容包括:甲型副伤寒沙门氏菌多克隆抗体的制备:采用标准菌株ATCC50001,甲醛灭活后制备成免疫抗原,成功制备抗甲型副伤寒沙门氏菌多克隆抗体,抗体经过辛酸-硫酸铵法纯化以后,效价为1:25600,纯化后抗体蛋白质浓度为2 mg/mL。采用SDS-PAGE凝胶电泳测得抗体纯度较好,杂带较少,分子量约为132 kD。甲型副伤寒沙门氏菌单克隆抗体的制备:成功制备抗甲型副伤寒沙门氏菌单克隆抗体,抗体经过辛酸-硫酸铵法纯化以后,效价为1:400,纯化后抗体蛋白质浓度为0.3 mg/mL。采用SDS-PAGE凝胶电泳测得抗体纯度较好,杂带较少,分子量约为146 kD。胶体金和金标抗体的制备:本研究选择用柠檬酸钠还原法制备20 nm胶体金溶液,并与40 nm胶体金溶液进行对比。建立了不同柠檬酸钠加入量,紫外吸收峰位置与胶体金粒径大小的关系,实验中优化了结合的蛋白浓度、结合的pH值和缓冲液体系等条件。得到工作条件为:最适蛋白浓度0.36mg/mL;标记最适pH为8.5:缓冲液是pH8.7的硼酸缓冲液;抗体稀释液配方为含1%BSA和5%糖的硼酸缓冲液。成功将20 nm胶体金与单克隆抗体偶联,并能稳定保存。免疫层析试纸条的组装与评测:利用抗甲型副伤寒沙门氏菌的多克隆抗体和单克隆抗体,应用胶体金免疫层析技术制备免疫层析检测试纸条。采用PVC底板、NC膜、玻璃纤维、吸水垫和样品点将免疫层析试纸条组装好。测试得到控制线抗体的最适浓度为1 mg/mL,检测线抗体的最适浓度为1 mg/mL,试纸条的检测限为106cfu/mL,试纸条具有良好的属外特异性,不与其他的菌发生反应,属内与除与伤寒沙门氏菌反应外,属内各群不反应。试纸条能在37℃封闭环境下加速老化30 d后使用正常,常温至少可保存4个月。
其他文献
[本刊简讯]由重庆市针灸学会主办,市针灸学会刮痧专业委员会,綦江区卫计委、中医学会、中医院承办的“中医治疗筋伤疾病学习班暨重庆市针灸学会刮痧专业委员会2016年学术年会”
随着素质教育的推进,小学音乐课堂教学发生了很大的改变。教师应不断地丰富教学方法,构建生动有趣的音乐课堂。文章主要对小学音乐课堂中的音舞结合教学方法进行了探究。
本文通过对贵州省清镇市新店西二勘查区9号、13号煤层气资源情况进行分析,认为区内煤层气储量规模中型,煤层气资源储量丰度中,且地质赋存条件较好,有利于煤层气的保存,具有较
供应链金融是中小企业融资的重要渠道,随着互联网技术的广泛应用和企业信息化水平的提升,基于虚拟产业集群的虚拟供应链金融发展开始受到普遍关注。本文从互联网+角度,通过对虚拟
课堂教学行为的有效改革,是改善当前学生课堂学习低迷状态的直接途径。以语文学科为例,从提问行为、拓展引导行为、时间管理行为、总结反馈行为四个方面,研究如何优化课堂行
目前建筑施工企业主要存在的困难之一就是资金短缺的问题,企业的资金如同企业的“血液”,企业的的应收账款规模庞大、而且沉淀时间较长,债权资产难以变现,资金不能及时收回,
<正>禽白血病是感染鸡群常见的垂直传播性病毒之一,它可以引发感染鸡群发生肿瘤、免疫抑制和生产性能下降等多种危害,并且这种危害随着种源的逐级放大效应进一步加重。在我国
会议
社会支持各因素对不同组织变革应激存在影响。利用自编组织变革压力问卷和工作社会支持问卷对新生代员工进行调查,结果显示不同社会支持与特定组织变革压力存在显著相关;路线模
生命伦理学包含的主要内容之一就是实验动物伦理问题。近年来,实验动物的伦理问题已经引起了很多人的关注。但是我国实验动物伦理研究发展比较迟缓,大多数学者还多停留在西方