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甲型副伤寒沙门氏菌是一种在公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病原菌。可以引起腹泻症状或者致死。目前,检测该菌的方法主要包括：传统检测方法、免疫学检测方法、分子生物学检测方法和仪器检测方法。传统检测方法准确,但耗时长,对实验员的操作能力要求较高；分子生物学检测方法灵敏、快速、特异性强,但需要较高的成本和较高的专业技术；仪器检测方法快速,但需要的成本高,另外,也需要比较庞大的数据库,对于一些少见或者新出现的菌无法检测；免疫学检测方法具有快速、操作简便、灵敏等优点因而在致病菌的检测中广泛使用。本研究采用甲型副伤寒沙门氏菌菌体作为免疫抗原,分别制备出抗甲型副伤寒沙门氏菌多克隆抗体和单克隆抗体,另外,在此基础上通过对胶体金、金标抗体和免疫层析的研究,制备疫层析试纸条,为甲型副伤寒沙门氏菌的快速检测提供了基础。本研究的研究内容包括：甲型副伤寒沙门氏菌多克隆抗体的制备：采用标准菌株ATCC50001,甲醛灭活后制备成免疫抗原,成功制备抗甲型副伤寒沙门氏菌多克隆抗体,抗体经过辛酸-硫酸铵法纯化以后,效价为1：25600,纯化后抗体蛋白质浓度为2 mg/mL。采用SDS-PAGE凝胶电泳测得抗体纯度较好,杂带较少,分子量约为132 kD。甲型副伤寒沙门氏菌单克隆抗体的制备：成功制备抗甲型副伤寒沙门氏菌单克隆抗体,抗体经过辛酸-硫酸铵法纯化以后,效价为1：400,纯化后抗体蛋白质浓度为0.3 mg/mL。采用SDS-PAGE凝胶电泳测得抗体纯度较好,杂带较少,分子量约为146 kD。胶体金和金标抗体的制备：本研究选择用柠檬酸钠还原法制备20 nm胶体金溶液,并与40 nm胶体金溶液进行对比。建立了不同柠檬酸钠加入量,紫外吸收峰位置与胶体金粒径大小的关系,实验中优化了结合的蛋白浓度、结合的pH值和缓冲液体系等条件。得到工作条件为：最适蛋白浓度0.36mg/mL;标记最适pH为8.5：缓冲液是pH8.7的硼酸缓冲液；抗体稀释液配方为含1%BSA和5%糖的硼酸缓冲液。成功将20 nm胶体金与单克隆抗体偶联,并能稳定保存。免疫层析试纸条的组装与评测：利用抗甲型副伤寒沙门氏菌的多克隆抗体和单克隆抗体,应用胶体金免疫层析技术制备免疫层析检测试纸条。采用PVC底板、NC膜、玻璃纤维、吸水垫和样品点将免疫层析试纸条组装好。测试得到控制线抗体的最适浓度为1 mg/mL,检测线抗体的最适浓度为1 mg/mL,试纸条的检测限为106cfu/mL,试纸条具有良好的属外特异性,不与其他的菌发生反应,属内与除与伤寒沙门氏菌反应外,属内各群不反应。试纸条能在37℃封闭环境下加速老化30 d后使用正常,常温至少可保存4个月。