背景:心脑血管疾病是目前世界上影响人类健康的第一大杀手。心脑血管疾病发生与病理性的血栓形成有关。在病理条件下,血小板暴露于可溶性激动剂（如凝血酶、ADP和血栓烷A2）并粘附到血管内皮下基质蛋白。这些粘附蛋白和激动剂,刺激细胞内信号转导级联反应,从而导致血小板粘附受体整合素α_IIbβ₃从静止状态转变为活化状态,使整合素α_IIbβ₃与纤维蛋白原RGD（Arg-Gly-Asp）基序结合,从而进一步引起血小板聚集。已有研究报道,模拟RGD基序的多肽对活化的血小板具有高亲和力,为预防和治疗血栓性疾病提供新的思路和方法^[1]。本课题组曾研发含有RGD的小肽RWR,其具有作用特异、靶向性强、毒副作用小等特点。但在后来的药代动力学研究中发现,RWR化学性质不稳定,半衰期较短。曾有报道含有KGD（Lys-Gly-Asp）的Barbourin蛋白对于整合素α_Ⅱbβ₃具有高度的选择性。本研究旨在利用KGD序列更强结合血小板表面α_IIbβ₃且能够有效抑制血小板聚集的特性,设计一种含有KGD的小肽,在此基础上根据国家创新药物指导原则初步进行临床前研究。目的:1.设计并合成一种含有KGD的小肽ωKWR。2.通过体外、体内实验探究其对血小板聚集和血栓形成的影响。3.根据治疗用生物制品非临床安全性评价指导原则对ωKWR进行药理、毒理学研究。方法:1.ωKWR的设计与固相合成固相合成法合成ωKWR,合成中用Fmoc/t-Bu保护侧链与N端;通过C18反向高效液相色谱进行分离纯化,电离喷雾离子化质谱鉴定纯度,真空冷冻干燥得到冻干粉。2.ωKWR的一般药效学研究家兔耳缘静脉取血后室温下离心制备富血小板血浆（PRP）,检测ωKWR对体外血小板聚集的影响;体外凝块回缩实验,分析ωKWR在体外抑制血栓生成作用;Collagen-Epinephrine诱导小鼠急性肺栓塞模型,研究ωKWR体内抑制血小板聚集作用;小鼠尾部出血时间测定,测定ωKWR对小鼠尾部生理性止血影响。3.ωKWR毒理学研究一次给予小鼠ωKWR（200 mg/kg）进行急性毒性实验,观察14天内小鼠死亡情况,测定ωKWR的LD₅₀。SD大鼠连续尾静脉给药30天,每日观察记录其一般状况,每周测体重和进食量一次,于最后一次给药后24h处死动物;进行血常规、生化指标以及主要脏器病理组织学检测,分析ωKWR亚急性毒性大小。采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验与小鼠精子畸形实验,探究ωKWR对遗传物质与生殖系统毒性大小。结果:1.采用固相合成法制备ωKWR,经C18反向高效液相色谱法纯化后真空冷冻干燥得纯度大于95%的纯品。后经电离喷雾离子化质谱（ESI-MS）鉴定进行验证。2.体外血小板聚集实验探索ωKWR最有效浓度为20μmol/l,肺栓塞模型和凝块回缩实验证实ωKWR在体内外均有良好的抑制血栓形成效果。尾部出血时间和凝血时间表明ωKWR在有效浓度范围内不引起正常生理性止血时间的增加。3.急性毒性实验结果显示在ωKWR给药浓度达到有效浓度1000倍时仍然无明显中毒现象。亚急性毒性结果显示连续给予ωKWR后实验动物各脏器和生化指标与对照组相比均无明显异常。致畸性和生殖毒性实验表明骨髓微核率和精子畸变率与对照组相比P值均大于0.05。结论:1.固相合成法制得ωKWR冻干粉针经测定纯度符合要求,结构准确。2.体内外实验表明ωKWR具有明显抑制血小板聚集效果,从而有效抑制血栓形成且这种效果不影响正常的生理性止血功能。3.毒理学实验测得ωKWR不会引起机体毒性反应染色体畸变具有较高的安全性。