穿刺巴斯德芽菌Ppqh-3的分离、扩繁及其对根结线虫的防效研究

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根结线虫(Meloidogyne spp.)是线虫中一类分布广、危害大、难以防治的植物寄生线虫,给许多国家的农林、园艺等产业造成巨大损失。目前根结线虫的防治方法仍以化学防治为主,化学杀线虫药剂的广泛使用,除了杀虫效果不彻底外,其带来的一系列副作用极为明显,正在逐步受到限制。因此,符合现代农业可持续发展战略理念的生物防治方法已成为根结线虫治理的首选措施。穿刺巴斯德芽菌是根结线虫的专性寄生菌,凭借其独特的作用方式及休眠孢子的强抗逆性,使其在根结线虫防治领域有着广阔的应用前景。本文通过采集样品,分离获得穿刺巴斯德芽菌相关菌株并进行了分类鉴定,通过吸附侵染试验,筛选对根结线虫具有高吸附侵染能力的活性菌株;基于穿刺巴斯德芽菌-根结线虫-植物的重寄生关系,建立了穿刺巴斯德芽菌扩繁体系;利用扩繁获得的穿刺巴斯德芽菌,研究其对南方根结线虫的防效,并探索了其防效机制。结果表明:(1)先后从海南13个市县的根结线虫发病区,采集植物病根样品共81份,经形态学鉴定获得7株巴斯德芽菌属菌株。将7株菌的16SrDNA序列与GenBank数据库中已发表的16SrDNA基因序列进行同源比对,7株菌中的3株与P. penetrans同源性达到99%,另外4株与P. penetrans同源性为97%。通过构建系统发育树,结合菌株形态与生理特征,鉴定3株菌为穿刺巴斯德芽菌,另外4株可能为Pasteuria属的新种。(2)经活体吸附试验筛选获得1株对根结线虫具有广谱侵染能力且活性较强的菌株Ppgh-3,其孢子在根结线虫二龄幼虫虫体表面吸附数最高,达到24.8个。(3)叶菜类中的空心菜及茄果类中的番茄对穿刺巴斯德芽菌的扩繁效率最高,镜检单株成熟孢子产量分别达到了1.79×107·株-1和2.14×108个·株-1。空心菜在4片真叶时接种,每株接种7500条线虫,分3次施入,单株根粉成熟孢子产量可以达到5.90×107个·株-1;番茄在6片真叶时接种,每株接种7500条线虫,分3次施入,单株根粉成熟孢子产量可以提至7.77×108个·株-1。(4)系统的分析了接种穿刺巴斯德芽菌后受根结线虫侵染的番茄的各项生理生化指标的变化。①线虫的侵染降低了番茄叶片中叶绿素的含量。但随着穿刺巴斯德芽菌接种量的增加,叶绿素的含量呈上升趋势,且接种量越高,效果越明显。②番茄叶片SOD、POD、CAT三种防御酶活性反应趋势接近,线虫侵染造成酶活先升高后降低,且降幅随侵染程度增加而增加,穿刺巴斯德芽菌接种量高的处理酶活缓慢升高,后期维持较高水平。根系中SOD、POD活性逐渐下降,而CAT活性迅速下降,穿刺巴斯德芽菌接种量高的处理三种酶活均逐渐升高并维持较高的水平。③番茄叶片和根系中VC含量的变化趋势接近,穿刺巴斯德芽菌低接种量处理和只接种根结线虫的对照VC含量均先升高后降低,下降幅度较大,高接种量的处理逐渐升高后,维持较高水平。叶片中MDA含量一直逐渐升高,线虫对照和低接种量处理一直维持较高水平,高接种量的处理含量较低,和无菌对照最为接近。根系中MDA含量逐渐降低,低接种量和线虫对照降幅最大,高接种量处理和对照接近。电导率逐渐升高,线虫对照和低接种量处理升幅最大,高接种量升高缓慢,和正常水平接近。④叶片和根系中H2O2、O2-两种物质均呈逐渐升高趋势且增幅随线虫侵染程度增加而增加。线虫侵染造成叶片和根系中的黄酮及总多酚类物质都呈下降趋势,穿刺巴斯德芽菌接种量高的处理的总多酚类物质维持较为平缓的趋势。(5)根结线虫侵染会造成番茄株高、产量、地上重显著降低,茎粗明显变细,根重、根冠比显著增加,根重、根系活力先升高后降低。接种穿刺巴斯德芽菌量最多的处理,株高比只接种根结线虫的处理增加6.55%,茎粗增加了16.99%,地上重增加了34.26%,根重减少了13.98%,病情指数降低了64%,果实产量增加了61.56%,与未接种根结线虫的处理无显著差异。二次防效结果表明,只接种线虫的处理,株高、冠重,果实产量等指标不仅远低于其他各处理,且低于第一次防效测定结果;接种穿刺巴斯德芽菌对根结线虫的抑制效果明显,在番茄定植60d后,接种穿刺巴斯德芽菌量最高的处理,其病情指数比只施根结线虫的处理降低了50%,单位根重雌虫数降低了47%,穿刺巴斯德芽菌对线虫的侵染率为52.9%,果实产量增加了83.64%。
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