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泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin proteasome system,UPS）是人体内蛋白降解过程中一项非常重要的机制,主要在细胞内蛋白的降解过程中发挥作用。26S蛋白酶复合体是UPS降解蛋白的主要场所。PSMD5/S5b是26S蛋白酶复合体中的一个亚基,它作为19S调节器中的一个非ATP酶依赖的亚基,在26S蛋白酶复合体的组装过程起到一个分子伴侣蛋白的作用。目的:1.探讨PSMD5/S5b在肝癌组织中的表达情况及其与各临床病理特征的相关性。2.构建PSMD5/S5b过表达质粒,验证其过表达的有效性。3.探讨PSMD5/S5b在肝癌发生发展过程中发挥的作用及可能的分子机制。方法:1.本研究选取2009年01月至2011年12月期间于桂林医学院附属医院行肝癌根治性手术切除的患者。选取了76例肝癌患者的癌组织及其相应的癌旁肝组织（adjacent normal liver tissues,ANLT）样本的石蜡切片,应用免疫组织化学（Immunohistoehemistry,IHC）检测76对肝癌组织和相应癌旁组织中PSMD5/S5b蛋白的表达情况,并且采用Western blot检测24对肝癌组织和相应癌旁组织样本中PSMD5/S5b蛋白的表达水平。2.应用Western blot检测肝癌细胞系和正常肝细胞中PSMD5/S5b m RNA和蛋白的表达水平,选取肝癌细胞SMMC-7721用于后续实验。3.应用吉凯基因设计1对特异性靶向PSMD5/S5b基因的过表达载体序列及1对阴性对照序列。将针对PSMD5/S5b基因的特异性过表达载体转染至SMMC-7721肝癌细胞,分别提取转染后24 h、48 h细胞的总RNA、蛋白。并采用RT-PCR及Western blot检测转染效率。4.采用过表达PSMD5/S5b效果最佳的质粒浓度进行后序的细胞生物学实验。PSMD5/S5b过表达载体转染至SMMC-7721肝癌细胞后,采用细胞计数CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）和平板细胞克隆形成实验分析肝癌细胞增殖能力的变化。5.PSMD5/S5b过表达载体转染至SMMC-7721肝癌细胞后,采用Transwell和细胞划痕实验分析肝癌细胞侵袭迁移能力的变化。6.将不同处理组的蛋白样品加入到抗体芯片#AAH-APO-G1-8（Ray Biotech,Norcross,GA,USA）进行抗原-抗体反应,洗脱除去未反应（结合）的蛋白;通过荧光扫描检测分析结果。用Cluster v3.0软件对差异蛋白进行聚类分析,并进行注释分析和分子网络图分析发现特异性信号通路。7.应用流式细胞仪,检测PSMD5/S5b过表达后细胞凋亡情况的变化。8.根据蛋白芯片的检测结果,将PSMD5/S5b过表达载体转染至SMMC-7721肝癌细胞后,应用Western blot检测肝癌细胞中Active-caspase-3、Pro-caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bad、XIAP、SMAC蛋白表达水平的变化,分析肝癌细胞凋亡情况的变化。结果:1.IHC检测76对HCC样本中PSMD5/S5b蛋白的表达水平,结果显示:有48例（63.15%）肝癌患者组织中的PSMD5/S5b蛋白水平明显低于相应的癌旁组织,有28例（36.85%）癌旁肝组织中PSMD5/S5b蛋白呈现高表达水平。2.Western blot检测的24对样本中,与相应癌旁组织比较,有18例（75%）肝癌样本中PSMD5/S5b蛋白表达显著下调,有2例（8.3%）肝癌样本中PSMD5/S5b蛋白表达上调,有2例（16.7%）肝癌样本中PSMD5/S5b蛋白表达无明显差异。3.RT-PCR和Western blot结果显示:PSMD5/S5b m RNA和蛋白在人肝癌细胞系Bel,Bel-5Fu,SK-Hep-1,Li7,SMMC-7721,Hep G2,Huh7中表达明显较弱,而在正常肝细胞LO2中则表达相对较高。4.RT-PCR和Western blot结果显示:用针对PSMD5/S5b过表达质粒转染人肝癌细胞SMMC-7721后,肝癌细胞中PSMD5/S5b的m RNA和蛋白质表达水平明显升高。并且,PSMD5/S5b过表达质粒质量为4 ug时的上调效果最佳,所以我们选用此质量进行后序的细胞生物学实验。5.与p Babe组比较,PSMD5/S5b过表达转染后人肝癌细胞SMMC-7721细胞的增殖能力和侵袭迁移能力受到显著抑制。流式细胞仪检测细胞凋亡、蛋白芯片结果表明过表达PSMD5/S5b后,人肝癌细胞SMMC7721细胞的凋亡增多,Western blot检测发现过表达PSMD5/S5b的肝癌细胞中Active-caspase-3、caspase-9、Bad蛋白表达水平明显上调,Pro-caspase-3、Bcl-2、XIAP、SMAC蛋白表达水平明显减少,表明过表达PSMD5/S5b基因后可促进细胞凋亡。6.相关性分析结果显示:肝癌组织中PSMD5/S5b的低表达水平与血清甲胎蛋白水平（alpha-fetoprotein,AFP）（>200 ng/ml）、淋巴转移、TNM分期、以及肿瘤分化程度等因素呈正相关（p<0.05）。7.采用Kaplan-Meier曲线评估,我们发现,与PSMD5/S5b高表达的患者比较,PSMD5/S5b低表达的患者术后总生存时间（overall survival,OS）（p<0.01）更短。多因素分析显示,PSMD5/S5b可作为预测肝癌预后的因素。结论:PSMD5/S5b在肝癌组织中表达明显降低,有可能作为预测肝癌病人预后的新生标志物。此外,PSMD5/S5b过表达后可显著抑制肝癌细胞增殖、侵袭迁移能力,并可促进肝癌细胞凋亡,表明PSMD5/S5b基因可作为治疗肝癌的靶向目标。