磁感应热疗对血管内皮细胞影响的研究

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目的:本课题旨在研究磁感应热疗对血管内皮细胞增殖、凋亡、周期、迁移及基因表达等的影响,并探讨磁感应加热对支架植入血管后血管修复和支架内皮化的影响,对磁感应热疗应用于防治冠脉支架术后血管再狭窄的可行性进行基础研究。材料和方法:(1)磁感应热疗对血管内皮细胞增殖及活力的影响:常规培养人脐静脉内皮细胞HUVEC,并用316L不锈钢支架在磁感应加热设备中对其进行磁感应热疗,热疗后继续培养,采用CCK-8法检测不同温度热疗后细胞的增殖率及活力。(2)磁感应热疗对血管内皮细胞凋亡及周期的影响:采用Annexin-Ⅴ和PI双染热疗后的血管内皮细胞,并通过流式细胞术检测细胞的凋亡情况。并且用PI单染热疗后的细胞,在流式细胞仪上统计细胞的周期变化。(3)磁感应热疗对血管内皮细胞迁移的影响:采用划痕法观察内皮细胞划痕后,划痕愈合的情况,并且利用Transwell迁移法统计内皮细胞迁移的数量,从而研究热疗后内皮细胞迁移能力的变化。(4)磁感应热疗对血管内皮细胞基因表达的影响:通过ELISA法检测热疗后内皮细胞中热休克蛋白70(HSP70)的相对表达量,并使用Western blot法研究HSP70表达的情况。结果:(1)43℃磁感应热疗组细胞的存活率为96.12±4.58%,47℃组细胞存活率仅为72.33±2.91%,且前者与对照组相比无统计学差异,后者与对照组相比差异显著。(2)43℃磁感应热疗组细胞的凋亡率为3.93%±1.03%,与对照组相比无显著差异。47℃磁感应热疗组细胞的凋亡率为50.44%±3.12%,凋亡率显著增加,与对照组相比具有显著差异。43℃磁感应热疗后细胞周期无明显改变,而47℃磁感应热疗后细胞的周期受到显著抑制,被阻滞在G0/G1期。(3)划痕后,37℃对照组和43℃热疗组迁移细胞的数量不断增加,划痕逐渐愈合,而47℃热疗组的细胞逐渐皱缩变圆并且脱落的细胞逐渐增多,划痕未见愈合。Transwell迁移实验结果显示,43℃加热后继续培养24h,内皮细胞迁移的数量为43±2个,与对照组迁移数量41±1个无明显差异,而47℃加热继续培养24小时后,内皮细胞迁移的数量仅为21±4个,与对照组具有显著性差异。(4)ELISA检测结果显示,实验组细胞HSP70表达量显著升高,43℃热疗后HSP70相对表达量为429.2pg/mL,47℃热疗组表达量为536.9pg/mL。Western blot实验表明,47℃热疗组HSP70表达量显著高于对照组和43℃热疗组。结论:(1)43℃磁感应热疗对血管内皮细胞的增殖及活力无明显影响,而47℃磁感应热疗显著抑制其生长。(2)43℃磁感应热疗不会导致血管内皮细胞凋亡及周期改变,而47℃磁感应热疗会诱导细胞凋亡,细胞周期停滞在G0/G1期。(3)43℃磁感应热疗对血管内皮的迁移能力无明显影响,而47℃磁感应热疗显著抑制了细胞迁移,推测会阻碍血管修复和支架内皮化(4)随着温度升高,血管内皮细胞表达的HSP70增加,这可能是细胞抗热及自我保护机制之一。
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