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第一部分 基于iTRAQ技术的子宫腺肌病患者子宫平滑肌组织蛋白质组学分析目的同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)联合质谱技术筛选出子宫腺肌病(adenomyosis,AM)患者差异性表达蛋白及其参与的生命活动通路。并初筛与收缩相关的差异蛋白及通路,为进一步研究AM患者子宫异常收缩机制提供目标蛋白及研究通路。方法使用匀浆+SDT裂解法提取AM患者(AM组)及与之基本信息相匹配的宫颈上皮内瘤变患者(对照组)子宫平滑肌组织样品制备匀浆蛋白。FASP酶解将样本蛋白酶解为肽段。iTRAQ试剂对样本蛋白进行标记。High PH RP分级、质谱鉴定和蛋白检索后筛选出差异蛋白。Blast2 GO对差异蛋白进行GO分析。KAAS数据库比对KEGG GENE数据库对目标蛋白进行KO归类获取目标蛋白参与的通路。Fisher精确检验进行GO功能注解、KEGG通路富集分析。Gluster3.0对样品和蛋白表达量进行分类。最后使用Java Trewview生成层次聚类热图。结果(1)相对于对照组,AM组存在差异蛋白93个,其中上调蛋白70个,下调蛋白23个。初筛与子宫收缩相关的差异蛋白13个,为参与钙离子信号调节的受磷蛋白、丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶、丝氨酸/苏氨酸-蛋白磷酸酶4调节亚基2;参与缩宫素信号调节的肌动蛋白样蛋白的两个片段(登录号:Q562T7、Q562M5)、β-肌动蛋白样蛋白3、细胞色素c氧化酶亚基。以及证明与心肌疾病发生相关的蛋白:肌动蛋白依赖染色质调节因子,亚家族c,成员1、附睾腔蛋白176、连环链蛋白α类风湿因子RF-ET6片段、非特征性蛋白质、晶体球蛋白CC1重链可变区。(2)结合GO功能注解及KEGG通路富集分析发现共有富集通路105个,初步筛选出可能与子宫收缩相关的通路8个,分别为1.钙离子信号调节通道;2.缩宫素信号调节通路;3.肌动蛋白细胞骨架的调控通路;4.心肌收缩相关通路;5.致肥厚型心肌病相关通路;6.致心肌炎相关通路;7.致心律失常性右心室心肌病相关通路;8.致扩张型心肌病相关通路。结论AM患者存在差异蛋白93个,初步筛选出其中可能与子宫收缩相关的差异蛋白13个,可能与子宫收缩有关的通路8个,主要为钙离子信号调节通路、缩宫素信号调节通路以及相关目前已证实与心肌收缩相关的通路。第二部分 子宫腺肌病患者子宫平滑肌组织收缩功能实验目的通过多通道生物信号分析系统体外采集子宫腺肌病((adenomyosis,AM))与非子宫腺肌病患者子宫肌条收缩信息,以及使用缩宫素及缩宫素受体拮抗剂(阿托西班)后的肌条收缩情况。为AM患者存在子宫异常收缩与缩宫素信号调节通路相关提供直接证据,并为进一步研究AM发病机制以及临床治疗提供理论依据。方法采集因AM行子宫切除术的子宫肌层组织共11例,同期采集基本信息与之相匹配的因宫颈上皮内瘤变行子宫切除术的子宫肌层组织10例作对照。取材方法:子宫切除后立即沿子宫横轴方向剪裁成15×5×5mm组织,每例患者取3份肌条,分为基础组(未给药)、OT组(加入缩宫素浓度10-7mol/L)、OTR-anta+OT组(加入浓度为10-5mol/L的阿托西班后立即加入浓度为10-7mol/L的缩宫素)。使用离体实验装置对子宫平滑肌组织进行肌条收缩试验,MPA2000离体实验系统软件记录子宫肌条收缩曲线。分析比较AM及对照组子宫肌条在不同条件下收缩频率、振幅及收缩曲线下面积(area under curve,AUC)。结果(1)基础状态下:AM组收缩幅度(2.41±1.34g)与对照组(2.69±0.97g)相比无差异(P=0.103)。AM 组收缩频率(5.88±1.74 次/10min 比对照组(3.53±1.25 次/10min)高(P=0.001)、AUC(1334.43±242.90kg·s/10min)比对照组(884.91±18.26kg·s/10min)大(P=0.032)。(2)相同浓度缩宫素作用下:AM组收缩幅度(3.34±0.87g)比对照组(2.69±0.97g)大(P=0.026)、收缩频率(7.60±2.82 次/10min)比对照组(4.03±1.58 次/10min)高(P=0.008)、AUC(1882.76±326.54kg·s/10min)比对照组(1287.24±235.24 kg·s/10min)大(P=0.002)。(3)使用缩宫素受体拮抗剂进行阻断后:AM组收缩幅度(2.68±0.76g)与对照组(2.44±0.43g)相比无差异(P=0.126)。AM组收缩频率(4.56±1.53次/10min)比对照组(2.76±1.87 次/10min)高(P=0.038)、AUC(1153.83±137.72kg·s/10min)比对照组(925.52±93.52 kg·s/10min)大(P=0.042)。两组收缩曲线相趋近。(4)对AM组在不同条件下收缩情况进行比较:使用缩宫素后,AM组收缩幅度(3.34±0.87g)比基础状态下(2.41±1.34g)大(P=0.007)、收缩频率(7.60±2.82 次/10min)比基础状态下(5.88±1.74 次/10min)高(P=0.008)、AUC(1882.76±326.54kg·s/10min)比基础状态下(1334.43±242.90 kg·s/10min)大(P=0.042)。使用缩宫素受体拮抗剂阻断后,AM组收缩幅度(2.68±0.76g)与基础状态下(2.41±1.34g)相比无明显差异(P=0.686)、收缩频率(4.56±1.53 次/10min)与基础状态下(5.88±1.74 次/10min)相比无明显差异(P=0.029)、AUC(1153.83±137.72kg·s/10min)比基础状态下(1334.43±242.90 kg·s/10min)小(P=0.017)。使用缩宫素受体拮抗剂阻断后AM组子宫收缩曲线与基础状态下相趋近。结论基础状态下,AM子宫平滑肌存在异常收缩,主要表现为收缩频率、AUC高于非AM子宫平滑肌。AM患者子宫平滑肌对缩宫素更敏感,表现为缩宫素作用下,AM子宫平滑肌收缩频率、幅度高于非AM子宫平滑肌。