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目的信号素3A（Semaphorin3A,Sema3A）是一种已知的分泌蛋白,它参与血管生成、器官移植、细胞迁移和细胞因子释放,与器官的发生、免疫反应和癌症有关。在肾脏中,Sema3A表达于肾小球上皮足细胞,远曲小管和集合管,其认为在肾发育和功能的调控中起着重要作用。实验研究表明,Sema3A的表达增加会引起短暂的大量蛋白尿,足细胞足突消失和内皮细胞损伤。而且Sema3A已经被确认在糖尿病引起的肾小球疾病和AKI中发挥作用,不过目前为止,它在临床表现为肾病综合征的慢性肾病及其他一些慢性肾损伤中所起的作用还未有报道。本课题目的在于澄清Sema3A与慢性肾病之间的关系,并探究其诊断价值。方法本课题参考我国慢性肾衰（CRF）分期标准,根据血肌酐浓度（SCr）筛选出了在2014年1月至2016年1月期间,天津医科大学总医院和天津医科大学第二医院收治的96例CKD1、2期的患者。这些病人的年龄为22-89岁。基于临床表现和活检病理报告（免疫荧光、光学显微镜和电子显微镜分析）诊断每一种肾病。患者被分为薄基底膜病（TBM）、微小病变肾病（MCNS）、IgA肾病（IgA-N）、膜性肾病（MN）、糖尿病肾病（DN）和局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）六组。我们收集了除DN组外的五组病人共76例患者的活检标本。在他们就诊时收集了所有96例患者的血清和尿样,并记录他们就诊时的uCr、SCr、uALB化验结果。课题分为两部分,第一部分探讨Sema3A对早期CKD的临床意义和诊断价值;第二部分研究Sema3A及其受体NRP1在肾脏的表达分析。第一部分:本研究是一个多机构的回顾性分析,评估了96例患者的血清和尿样。30位健康志愿者也参与了这项研究。此外,本课题还跟踪随访了部分从疾病发作到药物治疗的MCNS、IgA-N和FSGS患者,以检测尿中Sema3A表达水平的变化。使用酶联免疫吸附测定设备测定血清和尿液中Sema3A和NAG的水平,用微孔版阅读器测量OD值。所有的实验数据都用标准差表达。用KW法进行多次比较。通过Spearman相关系数对尿中Sema3A和uALB之间的相关性进行了分析。Wilcoxon符号秩检验分析了MCNS、IgA-N和MN患者在发病期和缓解期尿中Sema3A水平的变化。p值小于0.05被认为有统计学意义。运用ROC曲线分析Sema3A与uALB及二者联合检测对于诊断早期CKD的的价值。第二部分:使用除DN以外的其他五组早期CKD患者肾活检的标本。将标本进行石蜡封装、切片、对切片进行免疫组化处理。用光学显微镜观察Sema3A及NRP1在肾脏不同部位的表达情况,采用半定量计数法进行细胞染色阴阳性判断,双盲法对细胞进行评分。通过Spearman相关系数对Sema3A及NRP1之间的相关性进行分析。结果（1）早期CKD病人（所有参加研究病例）的尿Sema3A、尿NAG、uALB、血清Sema3A与对照组相比均有所升高。各病例组的尿Sema3A分别与对照组比较,各组的尿Sema3A水平均高于对照组,其中MCNS组升高最明显。各组uALB与对照组比较,除TBM外,其他组均高于对照组,MN组升高最明显。各组尿NAG与对照组比较,TBM和MCNS组没有统计学意义,IgA-N、MN、FSGS和DN组的NAG都有统计学意义地增加了,其中DN组增加最为明显。各组血清Sema3A与对照组比较,MCNS和MN患者的血清Sema3A水平高于对照组,结果有统计学意义。在发病期,IgA-N、MCNS、MN三组病人的尿Sema3A的水平均明显高于缓解期。DN组尿Sema3A与uALB呈正相关性,结果有统计学意义,其他各组均没有相关性,综合比较,早期CKD尿Sema3A与uALB没有相关性。在尿NAG与尿Sema3A的相关性分析中,TBM组和MCNS组没有表现出相关性,结果没有统计学意义,IgA-N组、MN组、FSGS组和DN组均呈明显的呈正相关,结果有统计学意义,早期CKD尿Sema3A与尿NAG有正相关性。联合检测早期肾病的效能高于uALB和Sema3A单独检测,且联合检的ROC曲线下面积最大。两两比较,AUC联合检测>AUCuALB,AUC联合检测>AUCSema3A,AUCSema3A>AUCuALB,差异均有统计学意义。（2）各组切片都有部分足细胞Sema3A染色阳性,在各组远端小管和集合管细胞的腔内侧会呈阳性染色,而近曲小管基本呈阴性。NRP1与Sema3A的染色定位情况基本相同。肾病各组病人Sema3A与对照组比较,在阳性细胞比例,平均着色得分,阳性病例数差异均有统计学意义。各组病人NRP1与对照组比较,在阳性细胞比例,平均着色得分,阳性病例数差异亦均有统计学意义。各组病人切片Sema3A与NRP1之间的阳性细胞比例相关性比较,TBM组为0.576,MCNS组为0.768,IgA-N组为0.486,MN组为0.625,FSGS组为0.379,均呈正相关。结论尿Sema3A的水平反映了以肾小球损伤为主的肾病引起的间质损伤的程度。同时尿Sema3A反映了早期CKD患者肾脏的急性功能或形态变化。并且,尿Sema3A也可以反映出IgA-N、MN和FSGS患者的肾小管损伤程度。Sema3A对于慢性肾损伤的诊断效能高于uALB,而二者联合检测的诊断效能高于二者单独检测。在参加研究的六种早期CKD中,Sema3A与NRP1在肾小球、远端小管和集合管中均呈强阳性表达;Sema3A与NRP1在肾脏的表达有正相关性。