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【目的】
研究姜黄素(Curcumin,Cur)对人类绒毛膜癌细胞株JAR细胞侵袭和转移的影响,探讨其作用机制。从Curcumin抑制侵袭转移能力及相关基因调控的作用中发现控制和治疗绒癌的新的有效方法。
【方法】
1、用不同浓度(10、20、40umol/L)Curcumin处理体外培养的绒毛膜癌细胞株JAR,在处理后24小时,以MTT比色法检测Curcumin对JAR细胞生长增殖的影响;
2、流式细胞仪检测Curcumin对JAR细胞周期的影响;
3、倒置光学显微镜观察不同浓度(10、20、40umol/L,)Curcumin 处理体外培养的绒毛膜癌细胞株JAR后,细胞形态学上的变化:
4、以细胞粘附人工重组基底膜实验检测Curcumin对JAR细胞粘附能力的影响;
5、用Transwell小室法检测Curcumin对JAR 细胞的侵袭能力的影响;
6、应用逆转录聚合酶反应(RT-PCR)检测Curcumin对JAR细胞侵袭转移相关基因 C-met mRNA 及 Ets-1 mRNA 的表达的影响。
【结果】
1.Curcumin对JAR细胞生长增殖的影响
MTT 抑制实验得出Curcumin对JAR细胞的增殖具有一定程度的抑制作用,且抑制作用呈时间、剂量依赖性。用 control,0.1%DMSO,Cur10、20、40umol/L分别处理JAR细胞6h、24h、48h,观察到在6h内,抑制率小于10%,且与对照组相比,差异无显著性。为了排除药物对细胞的损伤作用从而考察Cur对JAR细胞的侵袭和转移能力的抑制作用,选择 Cur10、20、40umol/L 作为实验终浓度。通过倒置光学显微镜拍照观察,可见到JAR细胞的形态变化:随着Curcumin浓度的增加,JAR 细胞逐渐缩小、变圆、分散,细胞核减少;而且抑制率随着浓度和时间的增加而增加。
2.人工重组基底膜侵袭实验
用Transwell小室法检测Curcumin对JAR细胞的侵袭能力。结果显示药物对JAR.细胞的侵袭能力有明显影响:浓度越大,细胞的侵袭能力就越弱。Cur20umol /L、40umol/L 对应的抑制率是20.66±2.3、38.66±5.0%,与对应组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01)。
3.细胞粘附实验
以细胞粘附人工重组基底膜实验检测Curcumin 对 JAR 细胞粘附能力的影响。结果显示药物在10 umol/L~40 umol/L内,对JAR细胞的粘附能力有明显影响,浓度越大,细胞的粘附能力就越弱。Cur10、20、40umol/L 抑制率分别达到:7.37±7.17%,18.78±4.60%,53.72±4.61%。后两者与对照组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01)。
4.流式细胞术
检测流式细胞仪检测Curcumin对JAR细胞细胞周期的影响。当 Curcumin10、20、40umol/L处理JAR细胞24h,处理细胞,上机检测。发现药物对细胞周期有影响,发现 Curcumin可以使G<,0>/G<,1>期细胞减少,G<,2>/M期和S期细胞增加。
5.反转录PCR
RT-PCR检测C-met mRNA、Ets-1mRNA 的表达情况。采用Bandscan进行光密度检测:结果显示药物在10 umol/L~40 umol/L范围内可以呈剂量依赖性下调 C-met、Ets-1基因mRNA的表达。
【结论】
Ccurcumin对JAR 细胞的增殖具有一定程度的抑制作用;能抑制JAR细胞的侵袭和粘附能力。Curcumin抗肿瘤转移的作用机制与 C-met mRNA、Ets-1mRNA 的表达水平有关。Curcumin 有开发成为临床抗肿瘤转移用药的潜力和价值。