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背景:肝癌发病率和死亡率在恶性肿瘤中分别位居第5位和第2位,严重威胁人类的健康,其中肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原发性肝癌的75%-85%。我国是肝癌高发地区,男性患者多于女性,70%肝癌患者发现时已进入晚期失去了根治性治疗的机会,且术后易复发和转移。目前治疗肝癌的化疗药物敏感性及疗效均较差,不良反应较多,因此,发现有效的安全用药是目前肝癌治疗的迫切需要。高三尖杉酯碱（homoharringtonine,HHT）是一种具有抗肿瘤作用的植物生物碱。已广泛应用于慢性髓系白血病（chronic myelocytic leukemia,CML）、急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）和骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes,MDS）等血液系统疾病的治疗。它的毒副作用相对较小,耐药发生率较低。但在实体肿瘤中的作用及机制尚未明确。目前尚无HHT在人肝细胞癌中的作用及其机制研究。研究表明,Hippo通路在多种癌症的发生及发展中发挥重要的调控作用。目的:研究高三尖杉酯碱抗肝细胞癌作用及其机制是否与Hippo信号通路有关,为临床治疗提供依据。方法:1、HHT对人正常肝细胞和肝癌细胞活力的影响:培养人肝癌细胞株Huh7和HepG2,分别加入100μl不同浓度（0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5μM）的HHT。分别培养24h,48h,72h后,用CCK8法检测细胞活力。选择450nm波长,在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值,计算细胞活力,同时计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。2、HHT对人肝癌细胞克隆形成的影响:分成对照组（control）组和0.05μM HHT组。将每组细胞以2000个细胞/孔的密度分别接种于六孔板中培养1-2周。当六孔板中出现肉眼可见的克隆时,终止培养,用结晶紫染色液染色。拍照,使用Image J软件统计克隆形成数,并计算克隆形成率。3、HHT对人肝癌细胞周期的影响:分成0μM对照组、0.05μM、0.1μM、0.2μM HHT组。作用48h后,PI染色,流式细胞仪上机进行分析。4、采用流式细胞术检测HHT对人肝癌细胞凋亡的影响:分成0μM对照组、0.05μM、0.1μM、0.2μM HHT组。作用48h后,加入FITC Annexin V和PI。1小时内用流式细胞仪分析。5、采用TUNEL&DAPI联合染色实验检测HHT对人肝癌细胞凋亡的影响:分成0μM对照组、0.05μM、0.1μM、0.2μM HHT组。用不同浓度HHT处理Huh748h。应用TUNEL&DAPI联合染色试剂盒检测不同浓度HHT诱导的Huh7细胞凋亡。6、HHT对人肝癌细胞作用机制的研究:分成0μM对照组、0.05μM、0.1μM、0.2μM HHT组。使用Western Blot（WB）方法检测不同浓度HHT处理Huh7 48h后凋亡蛋白Pro-caspase-9,cleaved-caspase-9,Pro-caspase-3,cleaved-caspase-3的相对表达以及Hippo信号通路相关蛋白（Mst1、p-Mst1、Sav、Lats1、p-Lats1、YAP、p-YAP（ser127））的表达变化。7、HHT对人肝癌细胞迁移能力的影响:分成0μM对照组、0.05μM、0.1μM、0.2μM HHT组。将细胞接种于六孔板内,用不同浓度HHT处理Huh7后,采用细胞划痕法检测细胞的迁移能力。8、HHT对人肝癌细胞侵袭能力的影响:分成0μM对照组、0.05μM、0.1μM、0.2μM HHT组。采用Transwell Boyden小室评估不同浓度HHT对Huh7细胞侵袭能力的影响。加入不同浓度HHT孵育48小时后,使用0.1%结晶紫染色,统计侵袭细胞的面积。9、HHT对裸鼠Huh7移植瘤的作用:将BALB/C雄性裸鼠随机分成control组、0.05mg/kg和1mg/kg HHT组。将Huh7细胞（5×106/只）注射到裸鼠腋下,从第11天开始,实验组裸鼠分别注射0.05mg/kg和1mg/kg HHT至第25天,对照组裸鼠只接受等量的PBS注射。同时隔天测量裸鼠体重和肿瘤体积大小。实验结束时将移植瘤切除并拍照,测量尺寸。每个组织分别切片进行HE染色及通过免疫组织化学方法分析cleaved-caspase-3及p-YAP（ser127）蛋白的表达。结果:1、HHT对人肝癌细胞活力实验的影响:细胞活力实验结果显示,HHT对肝癌细胞株Huh7和HepG2有抑制增殖的作用,且呈时间依赖性和剂量依赖性（P<0.05）地抑制增殖。从0.02μM开始即为有效浓度范围（P<0.001）。并计算出HHT作用于Huh7和HepG2细胞24h、48h和72h后的IC50分别是0.4685μM、0.08124μM、0.01697μM和0.0804μM、0.02909μM、0.00134μM。2、HHT对人肝癌细胞克隆形成的影响:克隆形成实验的结果显示,0.05μM HHT对肝癌细胞株Huh7和HepG2有很明显地抑制增殖的作用（P<0.001）。3、HHT对人肝癌细胞周期的影响:流式细胞术检测细胞周期的结果显示,HHT可以将肝癌细胞Huh7阻滞在S期。4、HHT对人肝癌细胞凋亡的作用及机制:流式细胞仪检测及TUNEL&DAPI染色均显示HHT作用于肝癌细胞株Huh7后,凋亡程度逐渐增加。Western blot检测显示HHT可以下调Huh7细胞中Pro-caspase-9和Pro-caspase-3总蛋白的表达,上调cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3总蛋白的表达。并且HHT能够上调Mst1、p-Mst1、Sav、Lats1、p-Lats1和p-YAP（ser127）总蛋白的表达,下调YAP总蛋白的表达。5、HHT对人肝癌细胞迁移能力的影响:细胞划痕实验结果显示,0.1μM和0.2μM HHT显著抑制肝癌细胞Huh7迁移。6、HHT对人肝癌细胞侵袭能力的影响:细胞侵袭实验结果显示,0.05μM、0.1μM和0.2μM HHT显著抑制肝癌细胞Huh7侵袭。7、HHT对裸鼠Huh7移植瘤的作用:HHT显著抑制裸鼠Huh7移植瘤的体积,并且上调了cleaved-caspase-3及p-YAP（ser127）蛋白的表达。结论:体内外实验均表明高三尖杉酯碱对肝癌具有抑制作用。且体外实验显示,高三尖杉酯碱可以通过上调Mst1、p-Mst1、Sav、p-Lats1、Lats1、p-YAP（Ser127）蛋白,下调YAP蛋白表达进而调节Hippo信号通路对肝细胞癌发挥抑制增殖和促进凋亡的作用;且高三尖杉酯碱对肝细胞癌的转移也起了一定的抑制作用。体内实验结果证实HHT可以抑制肿瘤体积大小,并且上调了cleaved-caspase-3及p-YAP（ser127）蛋白的表达,进一步验证了HHT对肝癌具有抑制作用,且与Hippo通路相关。但与Hippo通路的确切关系尚需进一步研究。