圆褐固氮菌G-3菌株聚羟基烷酸(PHA)的提取研究

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本论文对圆褐固氮菌G—3菌株聚羟基烷酸(PHA)的八种提取方法进行了优化研究。结果表明:(1)氯仿提取分为两种,温和搅拌法:用30倍体积的氯仿在50℃下与细胞温和作用2h,再加入30倍体积的水作用1h,得到的PHA纯度为98.7%,回收率为78%,分子量为1.4×106;剧烈搅拌法:30倍体积的氯仿在20℃下先将细胞温和处理10min,再剧烈作用15min,可得纯度为99%的PHA,回收率为89.6%,分子量为1.47×106;(2)NaClO法中,采用40%NaClO在20℃下处理细胞30min,所得PHA纯度为93.6%,回收率为91.1%,分子量为0.54×106;(3)NaClO—CHCl3法:30倍体积的CHCl3和30%(V/V)NaClO共同处理细胞1h,得PHA纯度为96.5%,回收率为91%,分子量为1.15×106;(4)SDS法:30g/l细胞在50℃下经7g/lSDS处理12min,得到的PHA纯度为89.2%,回收率为90%,分子量为1.04×106;(5)SDS—NaClO法:30g/l细胞在50℃下先经7g/lSDS处理12min,再用30%NaClO作用3min,得PHA纯度为97.5%,回收率为87.1%,分子量为0.83×106;(6)SDS—EDTA法:30g/l细胞在50℃下用7g/lSDS和10g/lEDTA共同作用15min,得PHA纯度为97.75%,回收率为89%,分子量为1.1×106;(7)酸法:0.2N HCl在100℃下作用50g/l细胞1h,得到的PHA纯度为95%,回收率为90.3%,分子量为0.905×106;(8)碱法:50g/l细胞在65℃下用0.15N NaOH处理1h,得PHA纯度为96.2%,回收率为92%,分子量为1.01×106。对上述各方法作综合分析比较,氯仿法中,剧烈搅拌较温和搅拌大大缩短了提取时间,而且成本也有大幅下降,更适合于实验室的提取研究工作。在化学试剂法中,SDS—EDTA法操作简单,价格低廉(成本约为¥0.092/gPHA),所得PHA纯度、回收率、分子量都令人较满意,是本实验室开辟的一种新的PHA提取方法。本文还就提取得到的PHA的理化性质及加工性能作了研究,结果证明,PHA的各种技术质量指标完全符合国际上目前采用的质量标准。 另外,本论文对PHA的脱色作了初步探索,实验就物理方法和化学方法针对氯仿提取细胞后得到的PHA有机相进行了脱色处理。表明,物理脱色较化学脱色效果明显,其中活性炭脱色效果最显著。
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