目的探讨丝素/左旋乳酸己内酯Silk fibroin(SF)/poly(L-lactic acid-co-ε-caprolactone)(PLCL)共聚物静电纺丝纳米纤维膜以及betacellulin(BTC)对视网膜干细胞(RPC)增殖分化的影响,为退行性视网膜疾病的治疗提供新的思路。方法1.检测不同比例SF/PLCL纳米纤维膜的电镜形态、纤维直径分布、孔隙率、溶胀率、机械性能和亲水角;倒置显微镜及电镜下记录细胞生长形态;q PCR和免疫细胞化学检测与RPC炎症、凋亡和增殖分化相关基因和蛋白的表达。2.增殖培养条件下,用CCK8、蛋白质免疫印迹以及免疫细胞化学法评估BTC对RPC增殖能力以及干性维持的影响;q PCR以及蛋白质免疫印迹检测BTC预处理对RPC多向分化潜能的影响。结果1.SF/PLCL(1:1)静电纺丝纳米纤维膜具有较好的细胞相容性,可显著促进视网膜干细胞的增殖;生长在SF/PLCL(1:1)上的RPC倾向于向β3-tubulin和rhodopsin阳性的视网膜神经元分化。2.增殖培养条件下,BTC能促进RPC增殖,且通过激活EGFR受体家族EGFR,Erb B2和Erb B4及下游Akt和Erk的磷酸化促进RPC增殖;与EGF预处理的RPC相比,BTC预处理的RPC朝视网膜神经元分化的能力增强。结论1.SF/PLCL(1:1)静电纺丝纳米纤维膜有明显的促RPC增殖能力且能促进RPC向视网膜神经元分化,提示SF/PLCL(1:1)在未来的视网膜细胞替代治疗中有潜在的应用价值。2.BTC通过EGFR/Erb B2/Erb B4-Akt/Erk通路显著促进RPC的增殖,同时BTC预处理可促进RPC向视网膜神经元细胞分化,提示BTC在视网膜干细胞的增殖和分化中发挥了重要作用,为视网膜退行性疾病的细胞替代治疗提供了新的实验依据。