随着肥胖患者的急剧增多,与之相关的2型糖尿病、动脉粥样硬化、心血管疾病以及癌症等疾病患者不断增加,这也使得肥胖成为覆盖全球的重大健康难题。研究表明,肥胖的产生与肥胖基因(ob)编码的瘦素蛋白(leptin)水平的失控有着密不可分的关系。瘦素的主要生理作用是控制食物摄入,增加机体能量消耗。鉴于此研究,开始探索利用瘦素治疗肥胖的可能性,然而瘦素抵抗现象的存在使得瘦素在临床治疗中并没有效果,只对少部分基因突变的缺乏瘦素的肥胖个体有效果。而新的研究也提供了新的方向:通过注射中性瘦素抗体能够与血液中的循环瘦素发生免疫反应,瘦素抗体与血液中的循环瘦素结合,中和抵消血液中的瘦素进而恢复瘦素的敏感性,使得正常肥胖患者体内的瘦素可以发挥正常的生理功能。酿酒酵母能够刺激树突状细胞(DCs)发生免疫反应,之后围绕着树突状细胞以及酵母互作开发的免疫疗法逐渐取得世人的关注。从最初的蛋白表达系统到表面展示系统,再到之后的DNA/m RNA/sh RNA等核酸系统,该系统的免疫效果逐步优化增强。本研究将ob基因与重组酵母系统相结合,开发一种针对瘦素调控的ob基因重组酵母,并利用活体实验验证了在不同饮食条件(高脂组、正常组)该ob基因重组酵母效果。本文的主要的研究成果如下:1.构建了两种不同的ob基因重组酵母:JMB84-CMV-OVA-ob、JMB84-CMV-ob。本研究通过基因克隆等技术,构建了三种不同的真核表达质粒,以及细胞水平上验证载体JMB84-CMV-OVA-ob-T2A-GFP-poly A表达盒的成功表达;之后以JMY31酵母菌为基础,构建了两种不同ob基因重组酵母。2.构建了ob基因原核表达载体,进行ob基因的原核诱导表达,并将ob基因原核表达的重组瘦素蛋白纯化作为后续抗体检测实验的抗原。3.在活体水平上对饲喂ob基因重组酵母进行性能评价。本研究通过饲喂ob基因重组酵母在不同的饲养条件下(高脂诱导、正常饮食),利用蛋白免疫印迹试验、酶联免疫吸附试验等实验方法对不同实验组的瘦素抗体进行验证,筛选出效果较好的重组酵母;此外,通过实验检测发现,该重组酵母系统能够降低血液中的循环瘦素、总胆固醇、甘油三酯的水平,同时可以有效地降低实验动物的采食量并减少体重的增加。尤其是对于高脂饮食诱导的小鼠,饲喂该重组酵母系统后能够有效地降低肝脏组织脂肪病变中的脂滴的大小。综上所述,本研究构建了两种针对瘦素调控的重组酵母菌株:JMB84-CMV-OVA-ob和JMB84-CMV-ob。随后利用重组酵母系统实现了对机体瘦素抵抗进行调节,并对两种不同的重组酵母系统的作用效果进行了评估,筛选出了效果较好的重组酵母系统JMB84-CMV-OVA-ob,能够有效地降低血液中的瘦素水平、甘油三酯、总胆固醇、动物的采食量、减少体重的获得以及有效地降低肝脏组织脂肪病变中的脂滴的大小,这也为未来利用瘦素抵抗原理治疗肥胖疗法的开发提供了有益的借鉴。