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目的：通过凝胶层析、离子胶层析从眼镜蛇毒中分离纯化出具有活性的NGF,探讨NGF对肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡以及蛋白质组表达的影响,在细胞水平揭示NGF抗肝纤维化的作用机制。方法：实验分组：根据不同实验分组如下：(1)MTT实验：空白对照组(单纯培养基培养),实验组(NGF干预,其中NGF终浓度分别为1、2、5、10、20μg/ml);(2)流式细胞术：空白对照组(单纯培养基培养),实验组(NGF干预,其中NGF终浓度分别为2、5、10μg/ml)；(3)双向电泳：空白对照组(单纯培养基培养),实验组(NGF干预,其中NGF终浓度分别为2、5、10μg/ml);实验方法：(1)采用shephadex G-75凝胶柱和CM Sepharose CL-6B离子胶柱二步色谱对眼镜蛇毒NGF进行分离纯化；(2)PC12细胞测定各洗脱峰的生物学活性,再用SDS-PAGE电泳鉴定具有NGF活性洗脱峰的纯度和相对分子质量；(3)MMT法检测NGF对HSC-T6细胞增殖抑制率；(4)流式细胞术检测NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响；(5)双向凝胶电泳技术分析NGF干预前后HSC-T6细胞蛋白质差异表达情况；(6)质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对双向凝胶电泳中差异表达在1.8倍以上的蛋白质点进行鉴定；(7)利用生物信息学对鉴定具有差异表达蛋白质点进行GO分类及蛋白质-蛋白质相互作用STRING网络分析；(8) Western Blot对差异蛋白质进行验证。结果：(1)眼镜蛇毒经shephadex G-75凝胶柱粗分离分出3个峰,NGF在第二峰；CM Sepharose CL-6B离子胶柱对具有NGF的第二峰进行再分离得到5个峰；(2)PC-12细胞鉴定各个峰,只有第Ⅲ峰具有NGF活性；SDS-PAGE检测NGF为电泳纯,相对分子质量为22.3KD；(3)MTT结果显示NGF能够抑制HSC-T6细胞增殖(与对照组抑制率23.8%土1.8%相比,NGF的浓度为1μg/ml时抑制率是25.1%士2.1%,p<0.05,5μg/ml时抑制率是48.2%±1.9%,p<0.01);(4)流式细胞术检测也发现NGF具有诱导HSC-T6细胞凋亡的作用,与对照组凋亡率4.36%土1.85%相比,NGF浓度2μg/ml时凋亡率为16.16%土3.02%,P<0.05：5μg/ml时凋亡率为22.15%土3.31%,P<0.05;10μg/ml时凋亡率为31.28%+2.16%,P<0.05。(5)双向电泳比较分析空白对照组和NGF干预组的2-DE图谱,找到差异蛋白质点47个其中在NGF干预组中表达上调22个,下调25个,部分差异蛋白质点随着NGF浓度的增加呈剂量依赖性;(6)质谱技术对表达差异在1.8倍以上的18个蛋白质点进行肽质量指纹图分析,鉴定出13个蛋白质；(7)生物信息学分析发现这些差异蛋白质主要参与细胞信号传导、细胞增殖、氧化代谢等过程；(8)Western B lot结果显示蛋白质TGF-β在NGF干预组中低表达,并随着NGF浓度增加表达反而降低。结论：(1)从眼镜蛇毒中可以分离纯化出具有生物活性的NGF；(2)NGF能抑制HSC-T6细胞增殖；(3)NGF能够诱导HSC-T6细胞凋亡；(4)NGF能使HSC-T6细胞蛋白质组发生差异性表达;(5)这些差异表达额蛋白质可能是肝纤维化过程中的关键蛋白,其通过信号传导通路参与细胞生殖、代谢、氧化应激、等途径实现抗肝纤维化。