从四川泸州天然气化学公司的油脂车间附近被废油污染的地方、成都屠宰场附近以及厨房、浴室下水道等处采集土样约200份，用含橄榄油底物的富集培养基富集培养3～5次后，用三丁酸甘油酯作底物，维多利亚蓝作显色剂组成的分离平板进行平板初筛。筛选出约300株产酯酶和脂肪酶的菌株。经过三丁酸甘油酯定性平板和橄榄油罗丹明B定性平板结合检测，筛选出产脂肪酶的菌株5株。经反复发酵培养测定酶活，选出其中一株传代性质稳定，产酶量高的细菌。参考伯杰氏细菌鉴定手册，经形态观察和生理生化实验，初步鉴定为假单胞菌（Pseudomonas sp. Lz1）。 对菌株Lz1进行产酶条件优化研究，发现碳源和氮源的种类，碳氮源比值以及细菌发酵的初始pH值对酶产量影响最大。接种量10％，种龄12h最佳。该菌株的最适产酶发酵培养基为（％）：酵母浸出汁1.5，黄豆粉1，NaCl0.2，K2HPO40.2，NaH2PO40.2，MgSO4·7H2O0.01，初始pH8.5。100mL三角瓶装液10mL，30℃，150r／min摇床培养46h，酶活最高可达19.1u／mL。 对菌株的发酵液进行酶学性质研究，结果表明，该酶的最适反应温度为40℃，最适pH8.5；在pH7.5～10.0之间稳定，其热稳定性较好，在30～55℃放置30min后仍能保持80％以上的酶活力。金属离子Li+、Na+、K+对酶有不同程度的激活作用，而Ni+、Co2+、Zn2+等则对酶反应有明显抑制作用。该酶对洗涤剂有较好的相容性。 为提高菌株Lzl产酶量，对该菌株进行了紫外线诱变，选用致死 率为90%左右的诱变剂量（15w紫外灯，3Ocm距离，照射时间305）照 射样品，挑选分离平板上透明圈直径与菌落直径比值较大的菌株初筛 复筛后，选出酶产量最高的菌株进行下一步诱变。经五次紫外线诱变 后，筛选到突变株Lzl一10，其产酶量较出发菌株提高了10%。 以Lzl一10为出发菌株，克隆碱性脂肪酶基因。提取细菌总DNA， 用限制性内切酶部分酶切后，回收2一6kbDNA片段，与克隆载体pUC18 连接，转化大肠杆菌，构建了该菌株的基因组文库。阳性克隆的筛选 工作仍在进行中。