越桔离体再生及其再生过程的组织学研究

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本试验以野生越桔子叶、胚轴和叶片为外植体进行越桔不定芽再生体系的研究,并在此基础上进行越桔再生的组织学研究。得出结果如下:1.不定芽的诱导培养:以MS、WPM、1/2MS和1/4MS为基本培养基,以越桔叶片、子叶和胚轴为外植体进行不定芽的诱导,发现盐浓度较低的WPM培养基最适于越桔不定芽的再生;子叶外植体的不定芽诱导率高于胚轴和叶片外植体,达97.9%。细胞分裂素以TDZ效果最好。生长素NAA和IBA的添加能明显提高愈伤组织诱导率,但却显著降低了不定芽分化率。子叶不定芽诱导最佳培养基为WPM+0.5 mg·L-1TDZ,2%蔗糖,PH5.8±0.2;胚轴不定芽诱导最佳培养基与子叶相同;叶片不定芽诱导最佳培养基为WPM+0.1 mg·L-1TDZ。接种方式为子叶和叶片近轴面向上摆放,胚轴切为0.5 cm横放。2.继代培养:不定芽诱导形成后在降低TDZ浓度的WPM培养基上经有效苗培养,不定芽得以快速伸长生长;当苗长至3.0 cm左右时,切取单芽茎段继代,继代培养基为WPM+0.01 mg·L-1TDZ+0.5 mg·L-1BA,腋芽分化率为89.7%,增殖系数为5.1。3.生根培养:试管内生根以蛭石为培养基固相支持物,1/2WPM液体培养基添加NAA和IBA混合生长素,生根效果最佳,生根率达87.7%,平均生根数为8.0,平均根长为2.0 cm;试管外生根以高浓度NAA速蘸法最好,生根率达69.6%,平均生根数为6.9,平均根长为1.6 cm。4.组织学观察:通过石蜡制片法,观察组织培养过程中不定芽及不定根的形态发生。发现培养2~3天时,子叶、胚轴和叶片切口和韧皮部薄壁细胞分裂均已启动;8~9天时,愈伤组织形成,并且可见旺盛分裂的细胞团;12天左右,芽原基形成,其细胞排列紧密,染色较深,核明显。越桔不定芽的发生为外起源,不定根的发生为内起源。
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