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硼替佐米(bortezomib,BTZ)作为多发性骨髓瘤患者的常用药物,虽然可抑制严重多发性骨髓瘤或其他癌症中肿瘤的发展,但由于信号处理功能的失能,许多不良症状包括其诱导的周围神经病变,都是由于神经功能失调所引起的。有研究认为许多细胞因子可能在介导神经性疼痛中发挥作用,但导致周围损伤的潜在分子机制尚不完全明确。近年来发现,神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)与嘌呤受体P2X家族有密切联系。嘌呤受体可以激活包括细胞外信号调节激酶(ERKs)、c-Jun N-端激酶(JNKs)和p38MAPKs在内的MAPK(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)家族信号通路,但两者之间是如何相互作用现在还不完全明确。本课题通过建立BTZ导致的NPP大鼠模型来探究在神经细胞中表达丰富的嘌呤能离子通道型受体7(purinergic ligand-gated ion channel 7 receptor,P2X7R)与导致应激和细胞凋亡的p38MAPK之间的关系,通过疼痛行为学,背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)卫星细胞(satellite glial cells,SGCs)、以及脊髓灰质后角(spinal dorsal horn,SDH)小胶质细胞的反应和磷酸化p38(phosphorylatedp38,p-p38)以及P2X7R表达的时、空间变化,并采用磷酸化p38以及P2X7R拮抗剂干预的方法观察大鼠行为学变化,旨在为进一步研究NPP及其防治提供实验依据。第一部分DRG卫星细胞P2X7R和p38MAPK通路激活介导BTZ诱发的神经病理性疼痛作用在DRG卫星细胞(satellite glial cells,SGCs)表达的P2X7R活化后会介导不同的痛觉信息传递和疼痛反应,传入神经元p38MAPK磷酸化不仅可以介导炎症反应,而且还会介导各种痛觉信号的产生和传递。本课题将会研究BTZ诱发的NPP大鼠初级传入DRG神经元SGCs P2X7R-p38MAPK这一信号通路激活在介导大鼠NPP的作用。根据上述论述,设计如下实验:(1)对照组:给予大鼠腹膜腔注射(peritoneal injection,i.p.)无菌生理盐水0.2 mg/kg;(2)抑制剂组:1)BBG组:大鼠腹膜腔注射BBG 50mg/kg;2)SB203580组:鞘内注射(intrathecal injection,i.t.)p38MAPK 抑制剂 10μg/10μl SB203580 10μl;(3)BTZ组:腹膜腔注射BTZ每日0.2mg/kg(i.p.);(4)BTZ+抑制剂组:1)BTZ+BBG组:BTZ注射前30min给予大鼠腹膜腔注射BBG 50mg/kg;2)BTZ+SB203580组:BTZ腹膜腔注射前30min鞘内注射SB203580 10μg/10μl(i.t.)。BTZ注射后大鼠机械疼痛阈值变化显著,使用BBG后对动物机械疼痛阈值、TNF-α(Tumor necrosis factor-α)等炎性因子表达、p38MAPK mRNA、p-p38蛋白表达以及p-p38在SGCs中表达均有影响,使用SB203580可上调大鼠机械疼痛阈值,下调炎性因子表达水平,但是对P2X7R表达无影响。以上结果说明在DRG SGCs中p38MAPK作为P2X7R的下游分子在BTZ所诱导的大鼠NPP中扮演关键的角色。第二部分SDH小胶质细胞p38MAPK通路激活与P2X7R活化在介导BTZ所诱导的神经病理性疼痛中的关系小胶质细胞作为中枢神经系统中的主要胶质细胞,在NPP进展过程中具有重要作用。在SDH小胶质细胞上表达的P2X7R也与疼痛信号的传递有关。本部分将探讨BTZ注射所致NPP大鼠SDH小胶质细胞p38MAPK信号通路激活与P2X7R活化之间的关系。实验分组与第一部分一致。实验发现:使用P2X7R抑制剂BBG进行提前干预可以明显上调大鼠机械疼痛阈值,影响炎性因子表达以及磷酸化p38蛋白表达变化,使用p38MAPK抑制剂SB203580不仅对大鼠机械疼痛阈值、炎性因子表达水平有影响,而且可以抑制NPP发生后P2X7R表达上调现象,这说明,SDH小胶质细胞中p38MAPK作为P2X7R的下游分子亦可以通过某种方式来上调小胶质细胞膜上P2X7R的表达,且从两者变化的以一致性方面也说明两者在同一条信号通路上,它们之间的影响是双向同向性的。这一发现对今后探究NPP也提供了新的契机。