心脏移植是一种用于治疗严重冠心病等终末期心脏病患者的有效的外科手段,成功的器官保存是心脏移植手术成功的必要前提。然而,目前临床上心脏的低温保存时间局限在4至6h以内,这与其它器官如肝、肾、胰的保存时间相比要短的多。如何有效地延长供心的保存时间是当前迫切需要解决的问题。研究发现在Celsior心脏保存液中添加二氮嗪,能促进长时低温保存后心功能的恢复并减少心肌细胞凋亡。热休克蛋白90(Heatshock protein90,Hsp90)是一类高度保守的蛋白质家族的成员之一。Hsp90表达增加可诱导细胞保护作用,其机制被认为与其抗凋亡作用相关。然而,Hsp90是否参与了二氮嗪对抗低温保存诱导的心肌细胞凋亡作用尚不明了。　　 目的：　　 研究Hsp90是否参与了二氮嗪对抗低温保存诱导的心功能下降,同时探究其可能机制。　　 方法：　　 (1)低温保存模型的建立及心功能测定:离体大鼠心脏于Langendorff恒压灌注装置上平衡后,经主动脉根部灌注4℃的Celsior心麻痹液,灌注时间控制在3min以内,心脏表面同时降温,待心脏停跳后分别置于不同成分的心麻痹液中(4℃)保存,3、6、或9h后心脏被重新置于Langendorff装置上再灌注60min。灌注条件同保存前保持一致。通过MedLab生物信号采集处理系统观察左心室发展压(LVDP)。　　 (2)细胞凋亡测定:取复灌末期大鼠左心室心尖部分,用TUNEL法观察细胞凋亡情况。计算阳性凋亡细胞占总细胞数的百分比即为细胞凋亡指数(apoptosisindex,AI)。　　 (3)Bid表达:取复灌末期大鼠心脏左心室心尖部分,匀浆提蛋白,用WesternBlot来检测Bid和tBid蛋白表达情况。　　 (4)Hsp90表达:取复灌末期大鼠心脏左心室心尖部分,用RT-PCR检测Hsp90mRNA水平,用WesternBlot来检测Hsp90蛋白质水平。　　 结果：　　 (1)心脏于单纯Celsior保存液中低温保存3-9h后,于复灌60min末测得各组心脏LVDP恢复率随着保存时间的延长而逐渐降低,心肌细胞凋亡指数随着保存时间的延长而逐渐升高。而与单纯Celsior保存液组相比,心脏在添加了二氮嗪(30μM)的保存液中保存9h后LVDP恢复率显著增高,心肌细胞凋亡指数显著下降。　　 (2)心脏于单纯Celsior保存液中低温保存3h后,Bid蛋白表达量与对照组无明显差异,且无明显裂解。低温保存6h或9h后,Bid裂解后产生的tBid(truncatedBid)片段量显著增加;然而,在心脏保存液中添加二氮嗪后,Bid裂解明显受抑制。　　 (3)与对照组相比,心脏于Celsior液低温保存3h,Hsp90mRNA与蛋白表达水平均明显增加。但随着保存时间延长至6-9h,Hsp90mRNA与蛋白表达水平却逐渐降低。与9h单纯保存液组相比,二氮嗪组心脏Hsp90mRNA与蛋白表达水平均显著提高。　　 (4)发17-AAG可部分取消二氮嗪增加低温保存心脏LVDP恢复率的作用。此外,与二氮嗪组相比,保存液中同时添加17-AAG和二氮嗪,Bid裂解产物tBid含量显著增加,心肌细胞凋亡显著增加。　　 结论：　　 二氮嗪可抑制低温保存诱导的心肌细胞Bid蛋白裂解与细胞凋亡,其机制可能与Hsp90表达增加有关。