miRNA-26a敲基因小鼠肺形态发育及肺表面活性物质合成的研究

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[目的]正常的肺形态结构及功能是胎儿生后进行呼吸运动的重要条件。本文的主要通过对miRNA-26a(miR-26a)敲基因小鼠胎肺不同发育阶段的肺组织进行形态学观察及肺表面活性物质(pulmonary surfactant,PS)合成情况的研究,探讨miR-26a对肺发育的影响,为临床肺发育相关疾病的诊疗提供理论依据。[方法]根据鼠肺发育的分期,选择孕16.5天(embryonic day 16.5,E16.5)、E18.5天及生后2天(postnatal day 2,P2)作为观察研究的关键时间点。利用苏木精-伊红染色(hematoxylin-euphorbia,HE)及透射电镜方法行miR-26a纯合敲基因小鼠与野生型小鼠肺组织切片的形态学观察;利用免疫组织化学(immunochemistry,IHC)、蛋白质免疫印迹(western blot,WB)及实时定量 PCR技术检测miR-26a敲基因小鼠肺发育不同时期肺组织中PS相关蛋白的表达量。[结果]①HE结果:与野生型小鼠相比,在E16.5天时,miR-26a敲基因小鼠肺组织含有更多扩张的含气管腔;在E18.5天时,两组小鼠胎肺组织中均有大量Ⅱ 型肺泡上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cell,AECII)产生,但 miR-26a 敲基因小鼠肺组织中肺泡结构较野生型小鼠更加成熟;在P2天时,miR-26a敲基因小鼠肺组织较野生型小鼠肺组织中含有更多的AECIIs、更少的Ⅰ型肺泡上皮细胞(type Ⅰ alveolar epithelial cell,AECI)。②透射电镜结果:与野生型小鼠相比,E16.5天时miR-26a敲基因小鼠肺组织细胞中含有更多的糖原颗粒;在E18.5天和P2天时,miR-26a敲基因小鼠的AECIIs较野生型小鼠AECIIs中含有更多的成熟板层小体。③IHC、WB及实时定量PCR结果:与野生型小鼠相比,在E18.5天和P2天时,miR-26a敲除小鼠肺组织中PS相关蛋白A(surfactant protein-A,SP-A)、SP-B及SP-C在蛋白水平及mRNA水平上的表达量均明显增高。[结论]敲除miR-26a基因能够促进胎肺组织形态发育,与野生型小鼠相比更为成熟,且在促进肺发育过程中PS相关蛋白表达量也增加,提示miR-26a对肺形态发育和PS合成具有抑制作用。
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