木薯蚕蛹虫草培养及其代谢组学研究

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蛹虫草(Cordyceps militaris)是一种具有药用、滋补功能,且能同时平衡、调节阴阳的珍贵中药材。但蛹虫草野生资源缺乏,数量少。自1987年蛹虫草的人工培养问世以来,先后在柞蚕、桑蚕上培养成功,而利用木薯蚕蛹作为寄主培养的蛹虫草相对甚少。本研究利用木薯叶片开展木薯蚕蛹的饲养,以蚕蛹接种虫草菌,培养蛹虫草和蚕虫草,对木薯蚕蛹虫草的常见生物活性成分含量进行测定。择优SC9蛹虫草与米基虫草进行代谢组学的非靶向成分比较分析。本实验为延伸木薯产业链,提高木薯附加值提供了新思路,为木薯蚕蛹虫草的保健功能提供理论依据。望本研究可对后续的木薯蚕蛹虫草深入研究起到铺垫和引导作用。本研究主要结果如下:1.采用3种不同基因型木薯叶片喂食木薯蚕18~25d,收获茧蛹。对不同基因型木薯叶片饲养的五龄蚕和蚕蛹各取100头称重,混合木薯叶片饲喂的5龄幼蚕体重最大且最先结茧,与SC9、花叶木薯、紫叶木薯喂食的木薯蚕重差异极显著(p(27)0.01)。化蛹后喂食SC9叶片的木薯蚕蛹最佳,蛹重量最大,但与混合木薯叶片饲喂的蛹差异不显著(p(29)0.05),而与花叶和紫叶木薯饲养的蚕蛹差异显著(p(27)0.05)。2.分别用不同木薯叶片喂食获得的木薯蚕蛹人工接种虫草菌,18℃、湿度80%、弱光环境下培养。第3d开始僵化并长出菌丝。SC9和混合木薯叶片饲喂获得的蚕蛹最先长出菌丝,第7d长出子座原基,其次为紫色木薯叶喂食的蚕蛹10d出草,而花叶木薯蚕蛹僵化后基本没有出草或个别长出不足1 cm的虫草。经过35~50天,收获成熟蛹虫草,子实体为圆柱状,最高可达12 cm,含水率为62.43%。其中,饲喂SC9叶片的木薯蚕蛹虫草出草达5~8根,长势均匀,较为粗壮、孢子头大且饱满。用五龄木薯蚕接种虫草菌,其感染速度较蚕蛹慢,5d开始僵化,10d长出菌丝,20~25d出虫草,52~60d收获成熟蚕虫草。3.木薯蚕蛹虫草内含有大量具有保健价值的活性物质。子实体含虫草酸18.24g·(100 g)-1,虫草素2.76 mg·g-1,总多糖7.33 g·(100 g)-1,肌苷2.49 mg·g-1,腺苷1.86mg·g-1,麦角甾醇2.41 mg·g-1,喷司他丁10.46 mg·g-1。非靶向代谢组学数据显示,蛹虫草子实体与大米固体培养基培养的子实体乙酰异烟肼含量差异倍数高达34.97、香豆酸的差异倍数达7.88、麦角新碱的差异倍数4.50、链霉素差异倍数4.47、L-酪氨酸差异倍数3.89、表没食子儿茶素差异倍数3.55、西酞普兰差异倍数2.89、安普霉素差异倍数2.34等。结果数据显示不仅蛹虫草的子实体有药用代谢产物,其蛹体在接菌后也含有着丰富的药用代谢产物,例如12-羟基二氢胆红素,S-乳糖谷胱甘肽、异烟酸、异性免疫球蛋白E等。4.蛹虫草子实体与大米固体培养基培养出的虫草子实体相比,共富集到184条代谢通路,其中显著差异信号通路有67条,极显著差异代谢通路有36条。接种虫草菌的蛹体与未接菌的蚕蛹相比,共富集到209条代谢通路,其中显著差异信号通路有60条,极显著差异代谢通路有35条。蛹虫草子实体与大米固体培养基培养出的虫草子实体差异代谢差异物有500种,蛹虫草子实体上调表达的离子数目为265个,下调表达的离子数目有235个;接种虫草菌蛹体与未接菌蛹体差异代谢物有697种,接种虫草菌蛹体上调表达离子数目为289个,下调表达离子数目有408个。
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