论文部分内容阅读
目的：免疫球蛋白(immunoglobulin, Ig)是机体免疫系统中非常重要的免疫分子,其功能主要是介导体液免疫,传统的免疫学理论认为,Ig是B淋巴细胞特有产物,机体其它细胞不产生Ig。然而,近年来人们发现Ig异位表达于多种上皮源性的恶性肿瘤组织和细胞系,初步研究表明异位表达的Ig具有生长因子样作用。我们研究小组已对IgM在多种上皮来源肿瘤组织和细胞系中的表达进行了报道,本实验旨在探讨喉鳞癌Hep-2细胞中IgM蛋白的表达情况,并对喉鳞癌Hep-2细胞表达IgM蛋白的生物学活性进行初步研究。方法：进行喉鳞癌Hep-2细胞体外培养,分别通过免疫细胞化学技术(链霉亲和素生物素法,SABC法)、免疫印记法(Western blot)以及流式细胞术(FCM)检测Hep-2细胞中IgM蛋白的表达情况；应用抗人IgM抗体,设置时间梯度和浓度梯度,通过细胞增殖抑制试验(MTS法)研究抗人IgM抗体对喉鳞癌Hep-2细胞生长增殖活性的影响,并对细胞形态进行观察；通过软琼脂细胞集落形成实验检测不同浓度抗人IgM抗体对Hep-2细胞增殖能力的影响；通过流式细胞仪(Annexin V/PI染色)和Hoechst染色方法,研究抗人IgM抗体对喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响,并观察凋亡细胞形态；应用流式细胞仪PI染色法观察抗人IgM抗体对喉鳞癌Hep-2细胞细胞周期的影响。结果：免疫细胞化学SABC法显示Hep-2细胞存在IgM蛋白表达且主要表达于细胞浆中；将Hep-2细胞的蛋白提取液进行免疫印记法检测,在分子量75KD处检出了阳性信号,提示Hep-2细胞存在IgM蛋白的表达；应用流式细胞仪间接免疫荧光法检测出Hep-2细胞的荧光强度为12.4±2.55,阳性对照组Raji细胞荧光强度为17.2±2.30,分别与阴性对照组荧光强度2.29±0.50比较差异显著(P<0.05),说明IgM在喉鳞癌Hep-2细胞中有表达；MTS显示喉鳞癌Hep-2细胞的抑制率随时间延长而增高,在第三天开始出现明显抑制作用,同时喉鳞癌Hep-2细胞的抑制率随浓度增加而增高,在50μg/ml浓度开始出现明显抑制作用,说明抗人IgM抗体具有时间和浓度依赖性地抑制喉鳞癌Hep-2细胞增殖生长的作用(P<0.05),并使细胞出现相应形态学改变；软琼脂细胞集落形成实验显示抗人IgM抗体能明显抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖能力,并具有浓度依赖性,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)；抗人IgM抗体能明显促进喉鳞癌Hep-2细胞凋亡,且使喉鳞癌Hep-2细胞呈现出典型凋亡形态改变,流式细胞仪Annexin V/PI染色和Hoechst染色方法检测Hep-2细胞凋亡率分别为(20.33±1.93)%和(20.45±3.45)%,与对照组比较差异显著(均P<0.05)；流式细胞术显示抗人IgM抗体还能影响喉鳞癌Hep-2细胞的细胞周期,导致G1期细胞减少,S期细胞增多,从而使细胞周期阻滞于S期(P<0.05)。结论：喉鳞癌Hep-2细胞能够表达IgM蛋白,且主要表达于Hep-2细胞浆中,抗人IgM抗体能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞增殖能力,诱导Hep-2细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞,提示喉鳞癌细胞表达IgM具有生长因子样活性,这可能为喉鳞癌治疗提供一个新的靶点。