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目前基因治疗的一个难点就是寻找一个安全，稳定，高效的基因转移系统，病毒基因转移系统和非病毒基因转移系统是两种常用的转染手段。出于安全性方面的考虑，我们实验室已经构建了核糖体基因区打靶载体(human ribosomal DNA-target ing vector)—pHrneo，它是一种人源非病毒载体，可以靶向性地整合到人核糖体基因区，并且已经成功地利用该载体将外源基因人凝血因子Ⅷ导入人纤维肉瘤细胞(HT1080)中，获得定点整合细胞克隆。但是，利用该载体转染正常细胞，其转染效率还是很低。目的：本课题利用携带有绿色荧光蛋白基因(GFP)的核糖体基因区打靶载体(pHrneo-GFP)电转染成人肝细胞株(HL7702)，优化电穿孔转染(电转染)的参数，并且将HL7702细胞同步化，提高该载体的电转染效率。方法：一．优化电转染参数细胞数和电转染缓冲液体积；孵育条件；电压与电容；电转染缓冲液(介质)是影响电转染效率的几个主要参数。我们设计了多组独立实验以优化上面这些参数。电转染细胞后，通过台盼蓝染色得到转染后细胞活率；流式细胞仪分析转染48小时后基因表达效率。优化电转染参数，得到一个最适合核糖体打靶载体转染成人肝细胞株(HL7702)的电转染条件。二．细胞同步化对电转染的影响考虑到处于G2／M期的细胞会有利于电转染，选择羟基脲(hydroxyurea)作为HL7702的细胞同步化药物，利用它将HL7702细胞同步在G2／M期，再对同步化处理细胞和阴性对照细胞同时进行电转染，分析细胞同步在G2／M期对电转染的影响。结果：优化四组电转染参数后，可以得到92.53±2.31％的转染后细胞活率和26.03±2.40％的GFP基因表达率。羟基脲可以将60％以上的HL7702细胞同步在G2／M期，并且得到了90％以上的转染后活率和60％以上的转染后基因表达率。结论：本课题通过对一系列电转染条件的优化，稳定得到了一个90％以上活率，60％以上外源基因表达率的电转染方法，为核糖体基因区打靶载体更好地在基因治疗中的应用提供了帮助。