EBV相关传染性单核细胞增多症患者血清外泌体病毒相关成份初步探讨

来源 :南华大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liujunqiang6455314
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目的:探讨EB病毒相关传染性单核细胞增多症(Epstern-Barr Virus Association Infectious Mononucleosis,EBV-IM)患者血清外泌体中EBV-DNA载量和EB病毒衣壳抗原(viral capsid antigen,VCA)、核抗原-1(nuclear antigen-1,EBNA-1)、核抗原-2(nuclear antigen-2,EBNA-2)、潜伏膜蛋白-1(latent membrane protein-1,LMP-1)、糖蛋白350(glycoprotein 350,gp350)等病毒蛋白表达水平,为EBV-IM的发病机制研究提供一些新思路。方法:选取我院住院患者检测EBV-CA-IgM(+)且临床确诊为EBV-IM的患者18例,为实验组;EBV-CA-IgM(-)/EBV-CA-IgG(+)且临床诊断非EBV-IM的患者13例,为对照组。收集两组患者外周血血清,采用差速离心法分离以上两组患者血清中的外泌体,并用Western blot和透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)技术鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测血清外泌体中EBV-DNA载量;采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清外泌体中EBV-CA、EBNA-1、EBNA-2、LMP-1、gp350等病毒蛋白表达水平;用SPSS 20.0统计软件和相关统计学方法分析实验数据。结果:(1)本实验成功分离出两组受检对象血清中的外泌体。该外泌体通过TEM观察为大小较均一,形态呈杯口状或圆盘状,直径约30~150 nm的小囊泡,同时采用Western blot检测到外泌体标志性蛋白CD63的表达进一步证实为外泌体。(2)血清外泌体中EBV-DNA载量检测结果显示:实验组受检人数为18例,检出率为55.56%,对照组受检人数13例,未检出;实验组EBV-DNA载量检出率明显高于对照组,差异有统计学意义(2χ=10.661,P<0.05)。(3)两组血清外泌体中EBV-CA、EBNA-1、EBNA-2、LMP-1及gp350等病毒蛋白表达水平结果如下:实验组血清外泌体中的EBV-CA、EBNA-1、EBNA-2、LMP-1及gp350等病毒蛋白表达水平结果用中位数(下四分位数,上四分位数)显示分别为0.21055(0,0.45925)、0.4541(0,0.49605)、0.2157(0,0.465525)、0.4442(0,0.484425)、0(0,0.451425);对照组分别为0.59(0.0364,0.6099)、0.0052(0,0.55035)、0.5983(0.04935,0.63195)、0.5236(0.04195,0.56975)、0.5837(0.0292,0.6108);其中两组间EBV-CA、EBNA-2、LMP-1及gp350等病毒蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05),两组间EBNA1的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)血清外泌体中EBV-DNA载量的检测可能对EBV-IM的诊断有一定的价值;(2)实验组和对照组的血清外泌体中EB病毒相关组分存在明显差异,其意义有待进一步探讨。
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