目的1.初步阐明骨癌痛的行为学特点及组织学的改变;2.探讨GRK6参与骨癌痛的调控作用。方法1.骨癌痛模型的建立与验证:胫骨内注射大鼠(180-220g SD雌性)Walker256乳腺癌细胞,建立骨癌痛大鼠模型(BCP)。分别在建模前后运用VFF(Von Frey filaments)、热痛仪及双足平衡实验(Weight Bearing Difference)行为学方法来测定大鼠的疼痛反应。2.胫骨特异性DRG神经元水平的研究:应用Western Blotting和RT-PCR技术检测骨癌模型胫骨特异性DRG中GRK6分子表达水平的改变;免疫组织化学用来检测GRK6在胫骨特异性DRG中的分布、共标情况。3、GRK6对骨癌痛的作用:鞘内注射慢病毒LV-GRK6以增加DRG水平GRK6的表达;运用Western Blotting方法验证GRK6过表达的效果;行为学检测过表达GRK6后对骨癌痛的影响。结果1.胫骨内接种大鼠Walker256乳腺癌细胞建立骨癌痛大鼠模型,显著降低骨癌大鼠的机械性痛、热痛阈值,增大双足平衡实验的双足承重差异;2.骨癌大鼠胫骨特异性DRG神经元中GRK6在mi RNA及蛋白水平表达显著降低,免疫组化显示GRK6主要分布在DRG中的神经元中;3.鞘内注射慢病毒LV-GRK6上调骨癌大鼠胫骨特异性DRG中GRK6的表达。缓解了骨癌痛大鼠的痛觉高敏。结论1、胫骨内注射大鼠Walker256乳腺癌细胞可以稳定地建立骨癌痛大鼠模型;2、GRK6参与了骨癌痛的调节;GRK6在DRG组织中主要分布在神经元中;3、过表达GRK6可以显著缓解骨癌痛大鼠的痛觉高敏;总之,GRK6可能成为骨癌痛新的治疗靶点。