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目的:神经嵴干细胞（neural crest stem cells,NCSCs）是一种胚胎发育过程中具有多向分化潜能的细胞,可通过上皮间质转化（epithelia-mesenchymal transition,EMT）从神经嵴分离,并分化出中枢与外周神经元以及胶质细胞等。目前大量的研究均着眼于NCSCs,但不同发育阶段的NCSCs的形态和生物学功能不尽相同,但目前阐述不多,因此本实验首先观察不同天数NCSCs的形态和体外增殖模式,为选取适宜的NCSCs提供依据。进一步对不同天数大鼠NCSCs的上皮间质特性进行分析,选取EMT过程中常见的E-cadherin/N-cadherin作为目的基因,利用免疫荧光（Immunofluorescence,IF）,Western blot及qRT-PCR技术,对不同天数NCSCs中E-cadherin/N-cadherin表达水平进行检测,探讨EMT在NCSCs迁移中的作用。研究方法:1、NCSCs分离培养健康成熟未孕的Wistar大鼠,雌雄大鼠按4:1比例午夜合笼,次日上午8:00做雌鼠阴道涂片,显微镜下观察发现精子者确认已交配,此日计妊娠0天（embryonic day0,E0）。选取E8.5,E9.5,E11,E13天的Wistar孕鼠,提取NCSC并培养传代。2、细胞爬片及细胞HE染色。3、细胞免疫荧光染色、Western blot及qRT-PCR检测不同天数大鼠NCSCs中E-cadherin/N-cadherin表达情况。4、统计分析数据以均数±标准差表示,采用SPSS软件对实验数据进行分析,采用2-△△ct法分析目的基因mRNA相对表达量变化,观察各天数细胞目的基因表达量的变化趋势。结果:1、培养不同天数的NCSCs利用DMEM/F12完全培养基成功培养出8.5、9.5、11、13天的NCSCs。2、不同天数NCSCs生长速度及HE染色结果小天数NCSCS细胞贴壁、聚集、成球速度较快,且传代能力稍强,可传至4代左右。大天数NCSCs则相反,生长速度慢于小天数细胞,且传代能力较弱,传至3代时可见神经嵴干细胞聚集及生长能力明显减弱,难以聚集成簇形成神经球。HE染色可见NCSCs细胞核较大,胞质胞浆少,体外培养时可见细胞贴壁后,该类细胞相互靠近,排列紧密,呈集落状生长,并最终形成神经球悬浮。随着原代细胞天数的增长可见细胞胞体及胞核稍减小,胞质胞浆所占比例增多。3、免疫荧光染色、Western blot及qRT-PCR检测E-cadherin/N-cadherin随着NCSCs天数的增大,E-cadherin表达降低,N-cadherin表达升高。其中8.5天NCSCs中E-cadherin表达较明显,9.5天、11天、13天表达明显降低。N-cadherin表达趋势与E-cadherin相反,8.5天N-cadherin表达不明显,9.5天、11天、13天则表达明显。结论:（1）NCSCs随着原代细胞天数的增大,细胞形态及生长速度均存在一定的差异。天数越小,细胞核越大,胞质越小,细胞生长相对越快,且传代能力越强。（2）NCSCs生长过程中E-cadherin降低,N-cadherin升高的趋势提示EMT在NCSCs迁移过程中起到重要作用,考虑NCSCs于胚胎发育的第8.5至9.5天之间发生EMT,进而发生细胞迁移。