【摘 要】
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以培养的HelaS3细胞为材料,RT-PCR方法克隆了人O-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(简称MGMT)的cDNA,并将此基因cDNA克隆到原核表达载体pET21a上,在大肠杆菌BL21中表达的该基因,得到
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以培养的HelaS3细胞为材料,RT-PCR方法克隆了人O<6>-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(简称MGMT)的cDNA,并将此基因cDNA克隆到原核表达载体pET21a上,在大肠杆菌BL21中表达的该基因,得到了具有生物活性的蛋白质.利用受体菌致死突变试验,将表达的蛋白对因烷化剂致突的DNA分子的修复功能进行了鉴定,发现重组蛋白的表达能有效提高受体菌对某些特异性烷化剂的抗性,具有酶特有的底物特异性.用PCR方法在MGMTcDNA部分片段的反义链末端掺入带有HS-(CH<,3>)<,5>的修饰碱基,利用其末端巯基以配位键固定在表面等离子共振(SPR)生物传感器的金膜表面上作为DNA探针,通过记录SPR共振角角度的变化来检测核酸杂交过程.实验发现样品的目的DNA片段的长度及空间结构,DNA探针长度都会对SPR传感器核酸杂交检测的灵敏度产生很大的影响.
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